论文部分内容阅读
肾素血管紧张素系统（RAS）由肾素、血管紧张素原、Ang Ⅰ、Ang Ⅱ、ACE、血管紧张素受体（ATR）等六大成分组成，其中AngⅡ为主要的生物活性肽，通过与靶细胞上ATR结合发挥生物效应。传统上认为RAS属于内分泌系统，主要调节血压和水电解质平衡，现在人们逐渐认识到许多组织存在RAS各个成分的表达，即RAS可分为循环RAS（cRAS）和组织RAS（tRAS）。有研究提示，cRAS主要起短期作用，维持内环境稳定，而tRAS则调节长期的器官功能，并且是病理性结构改变的原因。应用分子生物学技术，现已发现RAS所有成分几乎可见于肾脏的每一部位，肾内RAS作为一种肾脏内分泌、旁分泌和细胞内分泌系统，在肾脏病理生理中的重要作用逐渐为人们认识。 已知AngⅡ传统作用都是通过AT1R的。现在已有越来越多的动物模型及临床实验表明，ACEI和AT1RA不仅能有效降低血压，而且改善肾小球血流动力学，减少尿蛋白及增加胰岛素的敏感性， 浙江大学博士学位论文 对糖尿病肾病及其它类型肾小球疾病的进展均有延缓作用。但是， 尽管ACEI和AT术A的临床实验和动物模型表明阻断RAS可发挥其．． 不依赖于降血压的护肾作用，其确切的机制尚不明确。RAS中Ans3 11对肾小球细胞尤其系膜细胞的促增殖作用很大程度上是基于以 上实验而假设的，在细胞培养水平上直接观察 AnJ及 ATm对人 肾小球系膜细胞增殖及 COllV、TGF fi；表达的影响的报道很少。 飞 本文应用原代培养的人胎肾肾小球系膜细胞＊MC人 主要研 究AnJ对人胎肾HMC增殖，CollV、TGF6；蛋白质表达，TGF6；mRNA 表达的影响，观察ATR（Losartan）对Ansll 诱导的删C细胞增 殖，Col IV、TGF 8；蛋白质表达，TGP 0；mRNA表达的影响，以深人 了解RAS对肾脏细胞的作用，进一步明确AT夕A护肾的机制。 参考报道的方法原代培养人胚胎肾肾小球系膜细胞，应用免 疫组化法（含波形蛋白抗体、结蛋白抗体、及细胞角蛋白抗体） 鉴定删C。分别采用 MTT渗人法及流式细胞术观察 Aug 11、Losartan 对删C增殖、细胞周期（DNA合成、有丝分裂）的影响：取原代培 养n皿之第26代，删C传板贴壁24小时：换无血清培养液同步 24 ．J’时；加 Aug 11、Losartan作用 24或 48 ，J’时；移去上清，加 ‘入mT以皿 渗入法测定Hm增殖状况，或收获固定H皿，加入叮，。DNA染液，以流式细胞术检测各细胞周期的变化。采用双抗体夹心 队1加法观察Mg互、b＊＊n＊n对删C表达h二w、兀r p；的影响：’ HMC传板贴壁 24 ，J、时；HMC同步 24刁时；力日 Angll、Lossrtsfl作瞩 用48小时：提取删C细胞培养上清液：ELISA法检测C。IIV、TGF P；表达。再应用 RT－PCR法研究 Losartan对 Ans！I诱导的删C表 4 浙江大学博士学位论文 达 TGF＊ IllRNA的影响：HMC传板贴壁 48 ／J’时至 72 ，J、时；HMC同 步 24 ，J’时：加 Losartan、Aug 11作用 8 ’J’时；消化离心收获 HMC思 以 RT－PCR法检测 HMC TGF D；mRNA表达。邑 结果显示：与正常对照组比较，HMC经不同浓度 Aug 11门－ “一10－汕)刺激 24 ’J’时后，MTT渗人法检测删C数量无明显变化； 而 HMC经不同浓度 Aug 11刺激 48 ．J’时后，HMC增殖明显增强，其 刺激增殖作用呈浓度依赖性，其中以 IXIO’M Aug 11刺激作用最1 强。与正常对照组及 Aug 11刺激组比较，不同浓度 Losartan（IX 10－’M一SX10－’M）均显著抑制Angll诱导的皿C增殖，其中5X10－’M Losartan抑制作用最强，抑制作用呈浓度依赖性。与正常对照组 比较，不同浓度 Aug 11刺激 uvC2’ ’J’时后，HMC细胞周期发生明显 变化，S川／回期细胞比例显著升高。与 Aug 11刺激组比较，不同浓 度 Losartan显著抑帘 Aug 11诱导的 HMC S＋G。川期细胞比例的升高。 与正常对照组比较，不同浓度 Aug 11 门－“一10－沏)刺激 H肌48 ，J’时后，HMC表达 TGF民及 CollV均明显增加。与 Ansll刺激组比 较，不同浓度 Losartan（IX10’M一SX10’M）均显著抑制 Angll 诱导的 HMC表达 Col IV、TGF 6；。与 AnJ刺激组比较，不同浓度 LOSSYtsfl（IX10－‘M、IX10－’M）均显著抑＄ Aflgll诱导的删C表 达TGFp；mRNA。”． 以上资料提示：不同浓度 Aug 11均能刺激培养的人胎肾 HMC． DNA合成、有丝分裂及细胞增殖，其刺激作用呈时间依赖性和浓度 依赖性：AOgll刺激 HMC COIW、TGF