[目的]　　 中药白藜芦醇(resveratrol,Res)主要来源于蓼科植物虎杖的根茎提取物,现代医学研究发现Res具有抗菌消炎、调节免疫、抗衰老、镇咳平喘、降低血液粘稠度、改善微循环以及抗肿瘤等作用。近年来体内外试验研究均证实白藜芦醇对多种肿瘤细胞具有抑制作用,是继紫杉醇之后的又一新的绿色抗癌药物。　　 单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC)是一种特殊的荧光染料,可被细胞吸收并与自噬囊泡(autophagic vacuoles Avs)特异结合,在荧光显微镜下呈现点状绿色荧光,是一种定量检查自噬的特异性方法。　　 哺乳动物微管相关蛋白-轻链3(Microtubule-associated protein1 light chain3,MAP1LC3或称LC3)最初是作为微管相关蛋白1(MAP1)的第三条轻链被发现的,是自噬相关基因Atg8在哺乳动物中的同源基因。　　 本实验应用CCK-8试剂盒、MDC染色、流式细胞术、荧光定量PCR技术,研究Res对HL-60细胞的增殖、自噬的影响,为白藜芦醇治疗急性髓系白血病提供理论依据。　　 [方法]　　 (1)体外培养HL-60白血病细胞株,取对数生长期的细胞进行实验研究。　　 (2)CCK-8试剂盒检测不同浓度的Res对HL-60细胞增值的影响。　　 (3)倒置相差显微镜下观察不同浓度的Res作用下HL-60细胞的形态。　　 (4)MDC荧光染色检测Res作用于HL-60细胞后自噬现象的变化。　　 (5)流式细胞仪分析测定自噬比率。　　 (6)荧光定量PCR检测不同浓度Res作用于HL-60细胞后自噬相关基因MAP1LC3A的mRNA的表达。　　 [结果]　　 (1)实验结果显示Res作用于HL-60细胞12h、24h、36h、48h的半数抑制率(IC50)分别为209.92±62.251μmol/L,85.67±20.05μmol/L,78.89±16.12μmol/L,63.73±10.43μmol/L。随着药物浓度的增加、作用时间的延长,细胞抑制率明显增加。抑制率呈现出剂量、时间效应关系。　　 (2)倒置相差显微镜观察结果显示随着Res浓度的增加和作用时间的延长,活细胞数目越少,细胞透明度和亮度都降低,体积变小,而空白对照组的HL-60细胞呈增殖生长。　　 (3)200μmol/L的Res作用于HL-60细胞24h后,经MDC染色,置于荧光显微镜下观察,可见自噬囊泡的出现,表明Res可能具有诱导HL-60细胞发生自噬的作用。　　 (4)流式细胞仪分析测定其自噬比率,200μmol/L的Res作用于HL-60细胞24h其自噬比率是25.55％,而阴性对照组是4.47%,实验组与对照组比较明显增高,差异具有统计学意义(P＜0.01)。　　 (5)Res作用于HL-60细胞24h后,随着浓度的增加,自噬相关基因MAP1LC3AmRNA表达逐渐增多,各实验组与对照组相比较,差异具有统计学意义(P＜0.01)。　　 [结论]　　 (1)Res对白血病细胞系HL-60细胞的增值有明显的抑制作用,并呈现出剂量和时间效应关系。　　 (2)Res可诱导HL-60细胞出现自噬现象。