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腹膜透析是治疗终末期肾脏病的重要手段,具有血液透析无法替代的优势,在长期的腹膜透析过程中,不可避免地发生腹膜透析相关性腹膜炎,引起腹膜炎症细胞的浸润及腹膜细胞外基质的沉积,最终导致腹膜透析失败,在腹膜透析相关性腹膜炎中,以细菌感染为主,其中又以革兰氏阳性细菌感染最为多见。革兰氏阳性细菌的胞壁成分肽聚糖(peptidoglycan,PGN)是其特征性成分,具有致炎作用。腹膜间皮细胞作为腹膜的主要构成细胞,是腹膜透析时与腹膜透析液接触的第一道生理屏障,是腹膜损伤反应的第一步。在腹膜透析相关性腹膜炎中,腹膜间皮细胞既是炎症反应的参与者,又是受害者。研究腹膜间皮细胞在PGN作用下的反应是研究腹膜透析相关性腹膜炎中干预腹膜损伤措施的基础。Toll样受体家族是重要的膜受体家族,TLRs蛋白是由胚系基因编码的,是多种病原相关模式分子(pathogen associated molecular patterns,PAMPs)的受体,最近的研究表明,哺乳动物在对多种病原成分发生的直接天然免疫反应中牵涉到Toll样受体的作用,由Toll样受体介导的天然免疫反应是感染因子侵入机体的第一道防线。到目前为止,在哺乳动物中至少TLRs家族的十名成员已被发现。体外实验表明,作为Toll样受体家族成员之一的TLR2的存在使细胞对PGN发生反应,应用包藏TLR2无效等位基因的小鼠进行的体内实验,同样为证明PGN诱导的信号反应是由TLR2执行提供了有力证据。由PGN诱导的TLR2的活化通过激活核因子kappa B(NF-κB)而最终诱导免疫细胞释放炎症因子,如TNF-α等,这些炎症因子的释放可促进腹腔白细胞的聚集,刺激成纤维细胞产生细胞外基质,导致腹膜纤维化、超滤失败。过氧化物酶增殖物激活受体(peroxisome proliferators activated receptors,PPARs)属核受体超家族成员,在细胞内PPARs通过与维甲酸类X受体结合进而与DNA结合,从而起到调节转录的作用。作为过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)三种表型之一的PPARγ,在糖尿病治疗中具有重要作用,它能够加强胰岛素引起的葡萄糖摄取作用。此外,PPARγ同样能够抑制炎症反应,相关的信号通路包括①JAK-STAT;②NF-κB;③活化T细胞核因子(NFAT);④AP-1等。通过观察PPARγ激动剂罗格列酮对肽聚糖作用下大鼠腹膜间皮细胞toll-likereceptor 2(TLR2)表达的影响,为进一步探讨PPARγ激动剂罗格列酮能否通过抑制TLR2表达起到抑制炎症扩大、保护腹膜的作用提供基础。另外,腹膜透析液中的高浓度葡萄糖亦是引起腹膜炎性改变和腹膜纤维化的重要原因之一。有研究表明,高浓度葡萄糖可以促进腹膜间皮细胞表达IL-1等炎症介质。本研究通过观察高糖对TLR2表达的影响,从而探讨在无感染情况下高糖引起腹膜损伤的具体机制。方法1、实验用动物:SD大鼠(体重120-160g,清洁级,由中国医科大学实验动物中心提供)。2、胰蛋白酶消化法分离培养RPMCs,用RT-PCR法检测TLR2mRNA的表达,流式细胞分析仪检测TLR2蛋白表达。细胞分组:(1)不同浓度肽聚糖组:0,1.0,10,100μg/ml(2)10μg/ml肽聚糖作用不同时间组:0,2,6,12h组(3)10μg/ml PGN预孵育2h后,再加入罗格列酮(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)作用4h组(检测TLR2蛋白质)(4)10μg/ml PGN预孵育2h后,再加入罗格列酮10μmol/L作用4h组(检测TLR2mRNA)(5)不同浓度高糖组:0,1.5%,2.5%,4.25%(6)2.5%高糖作用不同时间组:0,5,10,20h结果1、PGN对RPMCs的TLR2表达的影响1.0μg/ml PGN可使RPMCs的TLR2mRNA和蛋白质表达增加(P＜0.05),100μg/ml PGN作用最强(P＜0.01);10μg/ml PGN作用2h后RPMCs的TLR2mRNA和蛋白质表达增加(P＜0.05),12h时TLR2mRNA和蛋白质表达达最大(P＜0.01)。2、罗格列酮对在PGN刺激下的RPMCs的TLR2表达的影响10μmol/L罗格列酮可抑制经10μg/mlPGN预孵育2h后的RPMCs的TLR2mRNA表达(P＜0.05);5μmol/L罗格列酮可抑制在10μg/mlPGN预孵育2h后的RPMCs的TLR2蛋白质表达(P＜0.05),20μmol/L罗格列酮的这种抑制作用最强(P＜0.01)。3、高糖对RPMCs的TLR2表达的影响1.5%高糖可使RPMCs的TLR2mRNA表达增加(P＜0.05),4.25%高糖作用最强(P＜0.01);2.5%高糖作用5h后RPMCs的TLR2mRNA表达增加(P＜0.05),作用20h后TLR2mRNA表达达最大(P＜0.01)。结论1、RPMCs存在TLR2的表达。2、PGN可以从基因和蛋白水平以浓度和时间依赖方式上调体外培养的RPMC-s的TLR2表达。3、罗格列酮可以从基因水平拮抗PGN对TLR2的表达上调作用,可以从蛋白水平以浓度依赖方式拮抗PGN对TLR2的表达上调作用。4、高糖可以从基因水平以浓度和时间依赖方式上调体外培养的RPMCs的TLR2表达。