α-玉米赤霉醇对体外培养成骨细胞的影响及机制

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目的:利用体外细胞培养的方法观察α-ZAL对大鼠成骨细胞增殖、成骨细胞内NO含量以及成骨细胞内c-jun基因的表达情况等,探讨α-ZAL对大鼠成骨细胞的影响,为其应用于绝经后骨质疏松症的治疗提供理论依据。方法:取新生SD大鼠(24h),断头处死后,用75%的酒精浸泡消毒10分钟,酒精中取出大鼠,从颈部沿头盖骨剥离皮肤,取下头盖骨,剔净、漂洗、剪碎。加入0.25%胰蛋白酶消化20min后,用PBS洗涤;加入0.1%胶原酶放入CO2培养箱中1h后,加细胞培养液,吹打均匀;实验时将细胞以105个/m1的密度接种于培养板,置培养箱中培养;待细胞贴壁,吸去培养液,换上新的培养液。将细胞分四组:正常组(加入正常培养液)、雌激素组(加入含雌激素10-10 mol/L培养液)、10-7 mol/Lα-ZAL浓度组和10-10 mol/Lα-ZAL浓度组,加入相应药物,然后在不同时间检测以下指标:(1)流式细胞术检测不同浓度α-ZAL对成骨细胞凋亡的影响。(2)试剂盒检测各组成骨细胞内NO含量的变化。(3)免疫组化方法检测各组成骨细胞内c-jun基因的表达情况。结果:(1)雌激素组、α-ZAL10-7 mol/L组和α-ZAL10-10 mol/L组成骨细胞凋亡率均低于正常组,其中α-ZAL对成骨细胞的影响要低于雌激素。(2)各浓度α-ZAL均使成骨细胞NO含量明显增加, 24h时随α-ZAL浓度增加,NO含量也逐渐增加, 10-10mol/L时升高作用明显。48h结果显示:α-ZAL10-7 mol/L和α-ZAL10-10 mol/L均能增加细胞中NO含量,但α-ZAL10-10 mol/L对成骨细胞的影响要弱与α-ZAL10-7 mol/L。(3)10-10 mol/L E2组,10-7 mol/Lα-ZAL浓度,10-10mol/Lα-ZAL浓度组较正常组在胞质表达深,正常组表达较浅,说明10-7 mol/Lα-ZAL浓度,10-10 mol/Lα-ZAL浓度组可以通过c-jun来抑制成骨细胞的凋亡。结论:(1)α-ZAL能抑制成骨细胞的凋亡,促进其增殖。(2)α-ZAL能调节成骨细胞内NO含量,可能与其对成骨细胞的调节作用有关。(3)α-ZAL能上调成骨细胞内c-jun基因的表达。
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