禽霍乱是血清型A巴氏杆菌引起的一种接触性传染病，其发病率和死亡率很高，给养禽业造成严重的经济损失。本课题组前期研究结果表明，血清型A巴氏杆菌ompH基因的突变株对小鼠的致病性相对减弱，表明OmpH具有致病作用，但其致病机理尚未清楚。因此，本论文对OmpH的致病性进行了以下研究工作：用PCR从禽巴氏杆菌C48-3株基因组中扩增出OmpH的编码基因，将其克隆至原核表达载体pQE-30的BamHⅠ和SalⅠ多克隆位点上，构建重组载体pQE-ompH，转化大肠杆菌M15，通过菌落PCR初选重组菌，IPTG诱导表达目的蛋白，亲和层析法纯化N端带有6个组氨酸标签的重组蛋白OmpH并制备其抗体。粘附试验比较野生株C48-3、突变株ompH和互补株C48-3C对CEF细胞的粘附作用，而粘附抑制试验和免疫荧光染色技术检测OmpH的粘附作用。血清敏感性试验比较野生株、突变株和互补株对鸡血清补体杀菌作用的抵抗力，吞噬试验比较小鼠腹腔巨噬细胞对野生株、突变株和互补株的吞噬作用，并检测抗OmpH抗体对巨噬细胞吞噬作用的影响。用OmpH和其抗体经配体印迹检测CEF细胞膜蛋白中的OmpH受体，MALDI-TOF质谱鉴定OmpH受体，免疫荧光染色检测该受体在鸡、兔、猪和牛食管粘膜细胞中的分布差异。酶切鉴定和DNA测序结果表明重组表达载体pQE-ompH构建成功，SDS-PAGE结果显示目的蛋白以不可溶性形式表达在大肠杆菌M15的细胞周质中，用Ni2+亲和层析柱从尿素变性后的沉淀中纯化得到重组蛋白OmpH，Western印迹结果显示抗OmpH抗体分别能与重组OmpH和天然OmpH发生特性反应。与野生株和互补株相比突变株对CEF细胞的粘附能力显著降低，而抗OmpH抗体抑制野生株和互补株对CEF细胞的粘附，但该抗体不影响突变株的粘附能力。野生株和互补株在鸡血清中的存活率显著高于突变株，但灭活鸡血清处理不影响它们的存活率。小鼠腹腔巨噬细胞对突变株的吞噬能力显著高于野生株和互补株，而抗OmpH抗体增强巨噬细胞对野生株和互补株的吞噬能力，但该抗体不影响巨噬细胞对突变株的吞噬能力。配体印迹结果显示OmpH能够与CEF细胞的49kDa膜蛋白结合，MALDI-TOF质谱结果表明OmpH结合蛋白是ATP合成酶β亚基，而配体印迹和免疫荧光染色结果显示在鸡和兔食管粘膜细胞膜蛋白中检测到OmpH结合蛋白，但在牛和猪食管粘膜细胞膜蛋白中未检测到该蛋白。上述研究结果表明，OmpH具有粘附作用、血清抵抗性和抗吞噬作用等生物学特性，它在禽巴氏杆菌对宿主的感染和致病过程中发挥重要的作用。