VEGF165基因转染兔骨髓间充质干细胞治疗兔激素性股骨头缺血性坏死

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目的:探讨使用基因转染技术将VEGF165基因转染入造模后实验动物的骨髓间充质干细胞中并结合自体骨移植治疗兔激素性股骨头缺血性坏死。  方法:  1.成年新西兰大白兔(18~23周龄)42只,体重2.5±0.5kg。每只使用马血清10ml/kg,经兔耳缘静脉注射一次,间隔两周后再注射一次。两周后肌肉注射醋酸泼尼松龙8mg/kg,间隔一天注射一次,共5次。以最后一次注射激素4周后,随机处死2只实验动物检查造模情况。  2.选取胫骨近端外侧,无菌条件下抽取5ml骨髓液,使用密度为1.073g/ml的Percoll分离液分离骨髓间充质干细胞并进行贴壁培养。检测造模后实验动物的骨髓间充质干细胞的增殖水平,并进行超微结构观察。  3.根据随机区组设计原则将造模后的实验动物分A组(股骨头不作处理);B组(行髓心减压+自体骨移植);C(行髓心减压+骨髓间充质干细胞+自体骨移植);D(行髓心减压+腺病毒转染骨髓间充质干细胞+自体骨移植)。每组10只实验动物。取髋关节后外侧切口暴露股骨头进行髓心减压,钻孔直径2mm,深4mm。分别对各组进行治疗。  4.术后3周处死实验动物进行病理学、免疫组织化学检查及WesternBlot检测股骨头内VEGF的表达。  结果:  1.携带有VEGF165基因的腺病毒可以转染从造模后动物模型体内提取的骨髓间充质干细胞并可以表达目的蛋白。表达目的蛋白的量较正常细胞少,差别据有统计学意义。  2.通过对实验各组进行病理学、免疫组织化学及WesternBlot检测我们发现:A组:空骨陷窝率(24.76±1.20%);软骨下血管(2.27±0.84个);VEGF平均灰度值(70.78±2.95);VEGF阳性面积百分比(8.72±1.83%);股骨头内VEGF的相对浓度(0.314±0.125)。B组:空骨陷窝率(21.82±1.78%);软骨下血管(2.85±0.85个);VEGF平均灰度值(61.07±2.91);VEGF阳性面积百分比(14.82±1.44%);股骨头内VEGF的相对浓度(0.664±0.090)。C组:空骨陷窝率(17.52±1.39%);软骨下血管(4.26±1.03个);VEGF平均灰度值(57.50±3.27);VEGF阳性面积百分比(17.61±1.79%);股骨头内VEGF的相对浓度(0.863±0.079)。D组:空骨陷窝率(12.92±1.79%);软骨下血管(7.19±1.72个);VEGF平均灰度值(49.20±1.91);VEGF阳性面积百分比(21.99±2.14%);股骨头内VEGF的相对浓度(1.029±0.097)。通过比较我们发现D组在软骨下血管、VEGF阳性面积百分比、股骨头内VEGF的相对浓度高于其他各组;在VEGF平均灰度值、空骨陷窝率低于其他各组,并且各组之间的差异具有统计学意义,说明D组的治疗具有一定效果。  结论:  1.兔激素性股骨头缺血性坏死实验动物体内的骨髓间充质干细胞可以作为基因治疗的受体细胞。  2.这种转染后的骨髓间充值干细胞对兔激素性股骨头缺血性坏死具有一定的治疗作用。
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