儿童急性粒细胞白血病AML1/ETO阳性患者微小残留病的实时定量研究

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儿童急性粒细胞白血病AML1/ETO阳性患者微小残留病的实时定量研究;背景:t(8:21)(q22;q22)染色体易位产生的AML1/ETO融合基因是儿童急性粒细胞白血病(AML)中最常见的融合基因之一.大规模资料统计表明,大部分患者骨髓缓解期(CR)AML1/ETO融合基因的PCR检测阴性,CR期PCR持续阳性可以预示复发.但是有人报道在部分长期缓解患者的骨髓中仍可检测到AML1/ETO的PCR阳性结果,因此CR期该基因的定量检测可能比单纯定性检测对指导该类患者的预后更有意义.该文率先在国内外以AML1/ETO融合基因作为AML的肿瘤标记,应用实时荧光定量PCR技术(real time quantitative PCR)检测AML患者的MRD水平.目的:探讨并研究RQ-PCR技术监测AML中AML1/ETO融合基因阳性患者MRD水平的临床适用性及临床指导价值.方法:(1)应用常规定性RT-PCR方法,从84例AML患者中筛选出20例AML1/ETO阳性患者.(2)连续pGM-T Easy载体和目的DNA片段(338bp),形成重组质粒标准品.(3)系列稀释重组质粒标准品,建立AML1/ETO标准曲线.(4)应用RQ-PCR法检测所有初治标本的敏感度.(5)RQ-PCR法检测患儿化疗过程中六个时间点的MRD水平,并以管家基因GAPDH为内参,校正RNA的质量和反转录(RT)效率的差异.结论:(1)重组质粒标准品建立标准曲线,可用于AML1/ETO阳性患者化疗后不同时期的MRD定量检测.内参基因GAPDH可校正RNA降解和RT效率的差异.(2)RQ-PCR法检测AML1/ETO融合基因的敏感性高、特异性强,适于临床应用.(3)随访标本MRD的定量检测及动态追踪检测具有预后指导价值.
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