洋葱伯克霍尔德氏菌转化胆固醇的研究

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甾体化合物在医学上发挥重要作用,特别是类固醇激素类药物具有强的抗感染、抗过敏和抗病毒能力,使其成为了仅次于抗生素的第二类药物。许多胆固醇衍生物具有重要的药用价值或者成为现代工业制药的关键中间体。本文以环保经济为基础,利用微生物转化技术在不改变胆固醇主体骨架的前提下,在其活泼或惰性碳原子上引入活性基团,寻找具有药理活性的转化产物。本研究的主要成果如下:(1)从土壤筛选得到能够转化胆固醇的菌株SE-1,菌株鉴定其为革兰氏阴性菌,生理生化特征与伯克霍尔德氏菌属(Burkholderia)相似,16S rRNA序列与洋葱伯克霍尔德氏菌(GenBank No.U96927)相似性为99%,最终确定为洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)。以筛选到的SE-1菌株作为供试菌株,分别进行转化胆固醇实验。(2)洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)转化胆固醇,借助硅胶柱层析、Sephadex LH-20手段获得两种单体转化产物,经1H-NMR、13C-NMR、DEPT1350等波谱技术鉴定这两种单体产物分别为:7β-羟基胆固醇(7β-HC);7-酮基胆固醇(7-KC)。(3)通过DEAE-52离子交换层析、SephadexG-200凝胶层析及非变性凝胶电泳等方法分离提纯了菌株SE-1产生的7-羟化酶,其比活为:37.22 U/mg,采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测得该酶的分子质量约为80 kDa。(4)对菌株转化胆固醇的发酵培养基的碳源、氮源、底物添加方式及发酵条件进行优化,在胆固醇-吐温乳化液的添加量为1g/L,碳源糖蜜5%,氮源(NH4)2S040.3%,接种量4%,发酵液pH7.5,36℃发酵的条件下,7β-羟基胆固醇的产率最高,达到34.4%,比优化前提高了20.8%。
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