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本课题是国家“863”高新技术发展计划(2003AA622060对虾和贝类非特异免疫增强剂的研究与应用)部分研究内容之一,重点探讨了A3α肽聚糖在南美白对虾大田生产应用中的主要技术参数,为A3α肽聚糖产品开发与推广应用提供了科学依据。本课题研究内容包括:A3α肽聚糖在生产中的投喂浓度、投喂时机、投喂方式。试验分别在大田和实验室进行。
在实验室研究的基础上,大田应用投喂浓度试验设置了2个浓度梯度,饲料中添加A3α肽聚糖量分别为1mg/kg、10mg/kg,结果显示投喂10mg/kg肽聚糖,对虾平均单产及平均成活率比投喂1mg/kg肽聚糖的试验组显著提高,与投喂没有添加肽聚糖的对照组比较,南美白对虾产量和成活率提高30%左右,经济效益显著。投喂方式试验设置3个方案:间隔7d、间隔14d及全程投喂添加A3α肽聚糖饲料,结果各试验组之间对虾的平均存活率差异不显著,但间隔7d投喂方式的对虾单产则显著高于间隔14d或全程投喂的试验组。
投喂时机试验选择在南美白对虾3个不同生长阶段(仔虾组体长1±0.1cm,幼虾组体长2.5±0.5cm,中虾组体长5.0±0.7cm)开始投喂含有A3α肽聚糖的饲料,在虾苗放养40d、60d、90d后从虾塘中取样检测三个试验组与对照组虾血清溶菌酶活性、血细胞吞噬活性和酚氧化酶活性,同时进行白斑综合症病毒(WSSV)的人工感染试验。结合大田生产观测记录对虾生长,养成对虾存活率和产量。结果,养殖40d,仔虾投喂组对虾血细胞吞噬活性、血清溶菌活性、酚氧化酶活性以及WSSV攻毒后存活率均显著高于其它试验组。养殖60d,仔虾投喂组、幼虾投喂组的溶菌酶和酚氧化酶活性显著高于中虾投喂组,但仔虾投喂组、幼虾投喂组之间无显著差异。仔虾投喂组对虾血细胞吞噬活性显著高于中虾投喂组,但与幼虾投喂组的差异不显著;养殖90d,三个投喂组之间对虾的血细胞吞噬活性、溶菌酶和酚氧化酶活性以及WSSV攻毒后的存活率无显著差异,但都显著高于对照组。大田生产试验统计结果:对虾养成存活率及单产依次为仔虾投喂组>幼虾投喂组>中虾投喂组>对照组,与实验室检测养成期间的虾血清溶菌酶活性、血细胞吞噬活性和酚氧化酶活性呈正相关。各项数据显示A3α肽聚糖投喂时机以仔虾期开始为好。
综合大田试验与实验室的研究结果,确定了A3α肽聚糖在南美白对虾生产应用中的主要技术参数:A3α肽聚糖在饲料中的适宜添加量为10mg/kg,从仔虾期开始采用间隔7d投喂方式。
为了扩大A3α肽聚糖在水产养殖中的应用范围,将A3α肽聚糖应用于鲫鱼养殖试验探讨了A3α肽聚糖对彭泽鲫非特异免疫与特异免疫机能以及生长的影响。用添加0.75~8.25mg/kg肽聚糖饵料以间隔7d的方式投喂彭泽鲫(Carassiusauratusvarpengze),测定鲫体重、白细胞吞噬活性、血清和体表黏液溶菌酶活性以及灭活AH菌攻毒后的免疫保护率,研究其对彭泽鲫生长以及非特异免疫因子的作用。结果表明,添加3.75~8.25mg/kg肽聚糖可显著提高彭泽鲫白细胞吞噬活性、体表黏液及血清溶菌酶活性,但对鲫生长无明显促长效果;鲫口服肽聚糖药饵后抗病能力增强,感染后的死亡率明显降低。
在肽聚糖投喂彭泽鲫试验基础上,给彭泽鲫注射接种F-AH疫苗再以间隔7d的方式投喂添加了3.75~6.75mg/kg肽聚糖饲料,通过测定鲫白细胞吞噬活性、血清和体表黏液溶菌酶活性、抗体效价以及活菌攻毒后的免疫保护率,研究肽聚糖对免疫后彭泽鲫免疫应答的增强作用。结果表明:肽聚糖与F-AH疫苗联合使用可促进机体免疫应答,提高F-AH疫苗免疫效价和AH攻毒后的免疫保护率;肽聚糖添加量在3.75~6.75mg/kg时,F-AH疫苗免疫效果与肽聚糖投喂量成正相关。