新疆阿魏菇多肽的制备及抗氧化活性研究

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我国是一个食用菌生产和消费的大国,食用菌-阿魏菇作为新疆特有资源,菇体洁白,质地脆嫩,味道鲜美,营养丰富,受到人们的青睐。阿魏菇中的营养丰富全面,糖类、蛋白质、脂肪酸含量较高,其中蛋白质含量约占干菇的20%,包含18种氨基酸,8种人体必需氨基酸全部具备。并且维生素(VC、VD)、食用纤维、钙、铁、锌、锰和微量元素的含量相对较大。由于新疆阿魏菇资源一直没有得到充分的应用和重视,对于其的开发利用处于初级加工方面,深加工方面如阿魏菇中的活性成分从分离纯化、理化性质和生物学活性等没有进行系统深入的研究。本研究利用碱溶酸沉的方法提取阿魏菇中的蛋白质,对其进行酶解制备具有抗氧化活性的多肽,并对抗氧化活性肽进行活性研究,为阿魏菇的深加工提供相应的理论基础。(1)利用超声波辅助碱溶酸沉提取阿魏菇蛋白,并通过响应面法优化提取条件。在单因素的基础上,根据Central Composite中心组合设计原理,运用Design-Expert.8.05数据分析软件,对阿魏菇蛋白提取进行了三因素五水平的优化分析。确定的最佳提取条件:pH10、超声温度27.09℃、超声时间9.45min、液料比5,在此条件下的蛋白提取率的理论值达到17.68%。(2)为了建立酶解阿魏菇蛋白制备抗氧化多肽的最佳优化条件,采用胃蛋白酶和胰蛋白酶分步水解的方法。运用四因素三水平的正交试验确定胃蛋白酶的酶解优化组合,以水解度和DPPH自由基清除能力为响应值,最终确定酶解的最优组合为:酶解时间2h,酶添加量8000U/g,底物浓度1%,pH2。在此基础上,采用响应面分析法研究胰蛋白酶酶解时间、酶添加量、pH、底物浓度对工艺的影响,以羟自由基(·OH)清除能力为响应值,确定的酶解最优条件为:酶解时间1.42h,酶添加量7744.93U/g,pH7.96,底物浓度1.35%,此条件下的·OH清除率为74.7%,与理论值75.59%相对误差在1%以内,说明所建立的模型具有较好的拟合性。(3)采用四种测定抗氧化能力的方法验证胃蛋白酶-胰蛋白酶酶解的阿魏菇抗氧化多肽的抗氧化活性。在测定清除DPPH自由基和OH自由基的能力时与抗氧化活性高的抗坏血酸作对照,结果表明阿魏菇抗氧化肽清除DPPH自由基和OH自由基的能力比抗坏血酸的清除能力略低,但也表现出较高的清除能力。同时,清除O2-。自由基和还原Fe3+的能力也较强。(4)以胃蛋白酶-胰蛋白酶联合酶解阿魏菇多肽水解物为原料,首先利用超滤法分离阿魏菇水解液,使用10kD的超滤膜,将阿魏菇水解液分离成>10kD的多肽组分和<10kD的多肽组分,并且<10kD的多肽组分的的·OH自由基清除能力和DPPH自由基清除能力均高于>10kD的多肽组分。将<10kD的多肽组分经DEAE-32纤维素分离后在220nm处检测洗脱峰,得到3个洗脱峰,并且组分P3的羟基清除能力较高。将DEAE-32纤维素分离得到的P3组分由葡聚糖凝胶SephadexG-25分离,在220nm处得到五个洗脱峰,组分P3-2的羟自由基清除最高,其分子量大约为1862Da。
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