目的:通过观察黄蒲通窍胶囊含药血清对体外培养原代海马神经元AD（Alzheimer’s disease）细胞模型的神经保护作用及Ca M-Ca MKIV信号通路的影响,探究黄蒲通窍胶囊对AD细胞模型神经损伤的保护作用及其分子机制,为黄蒲通窍胶囊治疗AD的临床运用提供现代实验基础,为临床治疗AD提供新的思路与方法。方法:取新生24h内的SD大鼠,分离海马组织,进行原代海马神经元的培养,显微镜拍照观察其形态学改变;免疫荧光化学法进行海马神经元鉴定;MTT法筛选黄蒲通窍胶囊含药血清最佳浓度范围,Aβ25-35造模浓度及黄蒲通窍胶囊含药血清对AD细胞模型细胞存活率的影响;倒置显微镜观察黄蒲通窍胶囊含药血清对AD细胞模型神经元损伤的形态学改变;Annexin V-FITC/propidium iodide（PI）双染法流式细胞术检测黄蒲通窍胶囊含药血清对AD细胞模型细胞凋亡率的影响;透射电子显微镜观察黄蒲通窍胶囊含药血清对AD细胞模型神经元损伤的超微结构的变化。后实验分为:正常组;AD模型组(30μM Aβ25-35造模24h);KN62抑制剂组（造模前2h加入:10μM Ca MKIV抑制剂KN62）;黄蒲通窍胶囊含药血清组（造模24h后加入15%黄蒲通窍胶囊含药血清）;KN62+黄蒲通窍胶囊含药血清组;尼莫地平组。RT-PCR法检测各组海马神经元Ca M、Ca MKK、Ca MKIV、tau m RNA表达水平。Western blot法检测各组海马神经元Ca M、Ca MKK、Ca MKIV、p-Ca MKIV、tau、p-tau蛋白表达水平。结果:1、海马神经元生长至第7天时神经元聚集,胞体圆润,神经突起密集成网,生长成熟状态良好,可用于后续试验;Map-2免疫荧光化学染色法显示,Cy3标记的Map-2在海马神经元胞浆中表达,染色发出橙红色荧光,hochest33258染核阳性呈蓝色荧光,图片合成后显示海马神经元纯度在90%以上。2、MTT结果显示黄蒲通窍胶囊含药血清浓度为5%,10%,15%时对海马神经元有较好的保护作用,Aβ25-35浓度为30μM时,对神经元抑制率达到50%左右,因此选择此浓度建立AD细胞模型。MTT及流式细胞术结果显示,与模型组相比,不同浓度黄蒲通窍胶囊含药血清组均可以显著提高海马神经元的存活率,当其浓度为15%时效果最好,此浓度选用为后续试验。倒置显微镜观察下,模型组海马神经元细胞皱缩,些许脱落,突起回缩断裂,各药物处理组细胞形态各异,损伤神经元突起回伸,神经元贴壁良好。透射电镜结果显示:模型组的神经元细胞器超微结构遭受严重破坏,核糖体数量减少,大量内质网扩张肿胀,线粒体肿胀,空泡样变性;与模型组相比,黄蒲通窍胶囊含药血清组细胞器损伤形态显著改善。3、RT-PCR结果显示:与正常组相比,模型组Ca M、Ca MKK、Ca MKIV、tau m RNA表达量明显升高（P<0.01）;与模型组相比,抑制剂组Ca M、Ca MKK m RNA表达没有明显变化,Ca MKIV、tau m RNA表达明显降低（P<0.01）,而黄蒲通窍胶囊通窍胶囊含药血清组、抑制剂+黄蒲通窍胶囊含药血清组、尼莫地平组Ca M、Ca MKK、Ca MKIV、tau m RNA表达水平显著减低（P<0.01）。4、Western blot结果显示:与正常组相比,模型组Ca M、Ca MKK、Ca MKIV、p-Ca MKIV、tau、p-tau蛋白表达量明显升高（P<0.01）;与模型组相比,抑制剂组Ca M、Ca MKK蛋白表达无显著差异,Ca MKIV、p-Ca MKIV、tau和p-tau蛋白表达显著降低（P<0.01）,而黄蒲通窍胶囊通窍胶囊含药血清组、抑制剂+黄蒲通窍胶囊含药血清组、尼莫地平组Ca M、Ca MKK、Ca MKIV、p-Ca MKIV、tau和p-tau蛋白表达量明显降低（P<0.01）。结论:1、黄蒲通窍胶囊含药血清能够改善Aβ25-35诱导的神经元损伤,对海马神经元具有保护作用。2、黄蒲通窍胶囊对AD细胞模型神经保护作用机制可能是通过抑制Ca M-Ca MKIV信号通路的激活以及减少tau蛋白的过度磷酸化有关。