【摘 要】
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为了初步揭示hBEX1的功能,该实验室在前期工作中以hBEX1全长为"诱饵"蛋白,用酵母双杂交技术筛选人胎脑cDNA文库,寻找与之相互作用的蛋白.结果发现,人染色质重塑复合体SWI/SNF
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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为了初步揭示hBEX1的功能,该实验室在前期工作中以hBEX1全长为"诱饵"蛋白,用酵母双杂交技术筛选人胎脑cDNA文库,寻找与之相互作用的蛋白.结果发现,人染色质重塑复合体SWI/SNF的核心成员hBNF5能与hBEX1相互作用.为了进一步验证这种相互作用,我们进行了GST-Pull down试验.在大肠杆菌中表达了GST-hBEX1融合蛋白,用Sepharose 4B进行亲和层析纯化.同时将hSnf5构建入真核表达载体pcDNA4/myc,转染HeLa细胞后,获得真核表达的带myc标签的hSNF5蛋白.GST-Pykk diwb结果证实,hBEX1和hSNF5能在体外结合.免疫荧光共定位试验显示,两者在细胞中的分布有重叠,均定位于细胞核.以上三种实验结果确证了hBEX1和hSNF5之间存在相互作用.另外,我们应用酵母双杂交技术研究了hBEX1与hSNF5相互作用的具体部位,得到hBEX1的第26至88位aa的肽段对于两者的相互作用是必需条件但还不是充足条件;hSNF5中单独的Rpt1或Rpt2结构域均不能介导两者的相互作用而第181到319位aa的肽段(Rpt1+Rpt2)足以介导两者的相互作用.为了探索hBEX1的生理功能,我们进行了细胞周期试验,观察到hBEX1与hSNF5共转染G401和Hela细胞后能促进细胞的增殖.
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