许多肿瘤的治疗特别是对白血病的首次化疗一般会取得比较好的结果，然而复发频繁，且每次复发以后的治疗效果降低，从而导致癌症病发死亡。尽管各种新的化疗药物和新的治疗方案连续不断地推出，但收效却总不太令人满意。肿瘤细胞对于化疗药物的耐受性是肿瘤治疗的主要障碍。因此，对肿瘤耐药现象与解决方法的研究具有重要意义。MTX被用于针对多种疾病的化疗方案，如急性淋巴细胞白血病；恶性淋巴瘤，非何杰金淋巴瘤和蕈样肉芽肿，多发性骨髓病，骨肉瘤。MTX临床应用时长伴随耐药发生。为揭示MTX的作用机制，和导致治疗失败的耐药现象的原因，MTX耐药细胞模型的建立无疑是以上众多研究中的第一步。一种未发生突变、未导入外来基因的耐药性明确、并且可以稳定遗传这种对MTX耐药的细胞系，更为接近临床实际情况，可以为上述研究提供可信的研究对象。SEM是儿童B-细胞急性淋巴细胞白血病细胞系，U2-OS是骨肉瘤细胞的一种。本文以上述两种细胞为原始细胞分别采用连续恒定药物刺激和脉冲式药物刺激两种方式建立MTX耐药细胞模型，并对耐药细胞系的耐药性进行鉴定。本实验在通过染色体核型分析、细胞总蛋白表达情况方法分别比对耐药细胞与原始细胞各项相应指标，确定耐药细胞对照原始细胞染色体未发生变异、蛋白表达未缺失，仍具有原始细胞相应的生命功能和特征。通过流式细胞术、MTT手段对各组细胞在不同剂量刺激下的增殖情况和凋亡情况进行了考察，数据显示各耐药组细胞在不同剂量下对不同剂量MTX产生的影响弱于原始细胞，提示耐药细胞对MTX敏感性降低。通过检测各耐药组细胞与相应原始细胞内耐药标志性蛋白DHFR的表达情况证实，各组耐药细胞内DHFR表达量相对于原始细胞有上调趋势，提示耐药组细胞产生耐药性。