沙丁胺醇的酶联免疫吸附检测方法研究

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本文从硫酸沙丁胺醇出发制备半抗原沙丁胺醇丁二酸衍生物,用混合酸酐法将半抗原与载体蛋白-钥孔嘁血蓝蛋白(KLH)偶联作为免疫抗原SAL-KLH进行动物免疫;与辣根过氧化物酶(HRP)偶联得酶标抗原SAL-HRP,作为直接竞争酶联免疫的酶标记物;采用碳二亚胺法合成SAL-OVA,作为间接竞争的包被抗原。通过特定的免疫程序,免疫日本大耳白兔,获得了亲合性很高的抗沙丁胺醇的抗血清,经免疫亲和层析法纯化后获得多克隆抗体,建立间接竞争酶联免疫检测方法。结果表明,此方法具有较高的灵敏度,IC50为1.7ng/mL,检出限(IC15)为0.09ng/mL;交叉反映表明,抗体与克伦特罗的交叉反应为32.7%,与莱克多巴胺、多巴酚丁胺、苯氧丙酚胺等均无交叉反应,说明抗体特异性较高。选择猪瘦肉进行基质影响消除的研究,结果表明,当沙丁胺醇浓度在较高水平时,基质曲线与标准曲线重合较好,当沙丁胺醇浓度在较低水平时,基质曲线与标准曲线不能重合,基质曲线的实验点与标准曲线的实验点上下浮动较大。在样品中添加三个水平的沙丁胺醇浓度,回收率达70%以上,为沙丁胺醇快速检测试剂盒的研制奠定了物质基础。为开发快速检测试剂盒,论文进一步验证了抗体和酶标抗原稳定性及贮存条件。研究表明,抗体和酶标在4℃条件下储存半年以上而不影响检测性能,有利于沙丁胺醇试剂盒的推广和应用,从而实现对沙丁胺醇的有效监控。
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