目的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜组织异常增长、关节骨结构损害为主要表现的自身免疫性疾病。致病特点是反复发作,病情缠绵,具有较高的致残率。长期应用西药治疗,疗效不佳,副作用大。中医治疗的特点是疗效较好、副作用较小。临床研究表明,当归拈痛汤对于治疗类风湿关节炎具有良好的疗效。研究发现,RA关节滑膜的过度增长主要是由于成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡抗性增加,导致的死亡和增殖平衡失调而引起。因此,本研究主要研究当归拈痛汤含药血清对成纤维样滑膜细胞增殖和凋亡的影响,进一步探究其作用机制,为该方的临床应用提供理论依据。方法1.当归拈痛汤对佐剂性关节炎(AA)大鼠的治疗作用。利用灭活的结核分支杆菌(M.tuberculosis,Mtb)粉末佐剂,构建AA大鼠的动物模型。按正常组、模型组、当归拈痛汤组、雷公藤阳性对照组4个分组进行干预,检测体重、足趾肿胀度改变,滑膜组织病理学变化以及炎症因子表达水平的改变。2.当归拈痛汤对AA大鼠关节滑膜Fas基因和相关蛋白的影响。检测滑膜组织 Fas mRNA 和相关的 Fas、FADD、Caspase-8、Caspase-3 以及 Bcl-2、Bax 蛋白表达量。3.当归拈痛汤对RAFLS存活、凋亡、迁袭的影响。免疫荧光鉴定RAFLSs,MTT法检测存活率,Hoechst 33342和流式细胞术来检测凋亡特性和凋亡率,划痕与侵袭实验检测迁袭能力。4.当归拈痛汤对RAFLS的Fas信号转导通路的影响。检测给药前后凋亡相关分子 Fas、FADD、Caspase-8、Caspase-3、Bcl-2、BaxmRNA 及其蛋白表达量的变化。抑制Fas通路后检测RAFLS凋亡的变化。结果1.体内实验:当归拈痛汤可以增加AA大鼠体重并减轻足趾肿胀度,改善滑膜组织的病变情况,降低炎症因子,提高AA大鼠关节滑膜中Fas mRNA及Fas、FADD、Caspase-8、Caspase-3、Bax 蛋白表达量,降低 Bcl-2 的表达量。2.体外实验:免疫荧光验证本实验提取出的细胞为RAFLS;与空白组相比,随着当归拈痛汤含药血清的剂量和干预时间的延长增加可显著抑制RA FLS的增殖(P<0.05)。中、高剂量干预48h的抑制效果较为显著,抑制率分别达48.27%、53.49%,诱导 RAFLS 发生凋亡,凋亡率分别达(10.31±3.64)%、(16.37±4.75)%,同时有效抑制RAFLS迁袭能力。与空白组相比,中、高剂量组的Fas、FADD、Caspase-8、Caspase-3、Bax mRNA的表达水平有明显上升,Bcl-2 mRNA的表达水平下降(P<0.05);同时 Fas、FADD、Caspase-8、Caspase-3、Bax 的蛋白表达均有显著增高,Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05),呈剂量依赖性。Fas阻滞剂能有效抑制Fas凋亡相关蛋白的表达,抑制Fas介导的RAFLS细胞的凋亡。结论:当归拈痛汤可以通过抑制RAFLS的增殖、诱导凋亡、减少迁袭来改善RA症状,其机制可能与调节Fas通路和线粒体凋亡途径相关。