【摘 要】
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目的研究受体型酪氨酸激酶RON的变异体RON△170对RON的自身酪氨酸磷酸化变异体RON△160的作用。方法NIH-3T3和3T3-RONA160细胞转染质粒pcDNA3.1-RON△170,建立3T3-RON△170和
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目的研究受体型酪氨酸激酶RON的变异体RON△170对RON的自身酪氨酸磷酸化变异体RON△160的作用。方法NIH-3T3和3T3-RONA160细胞转染质粒pcDNA3.1-RON△170,建立3T3-RON△170和3T3-RON△160△170细胞株；流式细胞仪胞膜蛋白免疫荧光法检测RON△170蛋白的表达；免疫沉淀法检测细胞RON的酪氨酸磷酸化；软琼脂培养法观察RON△170对3T3和3T3-RON△160细胞生长能力的作用；体外跨室趋化运动实验检测RON△170对3T3和3T3-RON△160细胞移动浸润能力的作用。结果成功建立3T3-RON△170和3T3-RON△160△170细胞株,流式细胞仪胞膜蛋白检测法证明其稳定表达RON△170蛋白；免疫沉淀试验结果显示RON△170能显著抑制RONΔ160的RON酪氨酸磷酸化；软琼脂生长实验示3T3,3T3-RON△160, 3T3-RON△170和3T3-RON△160△170细胞生长克隆数分别为12.33±2.08,121.33±12.58,14.00±3.00和34.33±8.32,3T3-RON△160△170与3T3-RON△160比较,差异有统计学意义,t=7.93,P<0.05；体外跨室趋化运动实验结果示4组细胞穿膜细胞数分别24.50±3.50,399.00±13.00,31.00±6.00和200.50±11.50,3T3-RON△160△170与3T3-RON△160比较,差异有统计学意义,t=132.33,P<0.05。结论受体型酪氨酸激酶RON的变异体RON△170无酪氨酸磷酸化功能,且可显著抑制RON△160的自身酪氨酸磷酸化,抑制RON△160对3T3细胞的转化作用和致肿瘤性,RON△170具有显性抑制变异体特性。
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