【摘 要】
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当前已商业化应用的微藻多数为单细胞微藻,其采收的高能耗是阻碍微藻产业化发展的主要原因之一。相对于单细胞微藻而言,丝状微藻具有较长的藻丝,不仅可以抵抗浮游动物的吞食,还可以提高藻细胞收获效率,从而降低微藻生产成本。因此本研究以三株新分离丝状微藻为实验材料,研究在不同光强、初始氮浓度和培养基条件下三株丝状微藻生长和生理生化规律,筛选出高产油脂的藻株在其最适条件下进行平板反应器放大培养及油脂扩大提取,最
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当前已商业化应用的微藻多数为单细胞微藻,其采收的高能耗是阻碍微藻产业化发展的主要原因之一。相对于单细胞微藻而言,丝状微藻具有较长的藻丝,不仅可以抵抗浮游动物的吞食,还可以提高藻细胞收获效率,从而降低微藻生产成本。因此本研究以三株新分离丝状微藻为实验材料,研究在不同光强、初始氮浓度和培养基条件下三株丝状微藻生长和生理生化规律,筛选出高产油脂的藻株在其最适条件下进行平板反应器放大培养及油脂扩大提取,最后对油脂进行抗氧化性实验。主要得到以下实验结果:(1)双星藻(Zygnema sp.JNU40)隶属于链藻门、双星藻纲、双星藻属。研究了不同光强(100和300μmol/(m2·s))和6种初始氮浓度(3、6、9、12、15和18 mmol/L)对其生长和生化组成的影响。在300μmol/(m2·s)光强,12 mmol/L初始氮浓度条件下最有利于双星藻生物质积累,其最高生物量可以达到6.60 g/L,而3 mmol/L初始氮浓度促进了油脂和脂肪酸的积累,油脂最高含量占总干重的32.13%,且脂肪酸组成主要包括棕榈酸(C16:0)、油酸(C18:1)、亚油酸(C18:2)和亚麻酸(C18:3),其中油酸含量最高达到总脂肪酸含量的55.01%;在100μmol/(m2·s)光强,初始氮浓度为18 mmol/L时,双星藻总蛋白质和总碳水化合物含量达到最高,分别占总干重的16.35%和37.70%,而此时总脂含量仅占总干重10.16%。(2)多毛峭壁藻(Barranca multiflagellata JNU39)隶属于绿藻门、胶毛藻目、巴兰卡藻新科。研究了不同光强(100、300和双侧300μmol/(m2·s))和不同初始氮浓度(1、3、6、9、12、15和18 mmol/L)对其生长和生化组成的影响。结果发现,在双侧300μmol/(m2·s)光强,9 mmol/L初始氮浓度条件下,最高生物量达到6.92 g/L;1 mmol/L初始氮浓度有利于油脂和脂肪酸的积累,最高总脂含量占总干重的53.13%。脂肪酸的主要成分为棕榈酸、油酸、亚油酸和二十碳烯酸(C20:1),在300μmol/(m2·s)光强,3 mmol/L初始氮浓度条件下其油酸最高相对含量占总脂肪酸的60.80%;最高绝对含量占总干重的25.44%。多毛峭壁藻在培养后期转变为红色,色素分析表明其可积累大量角黄素和叶黄素,最高含量分别为1.50 mg/g和3.33 mg/g。除此之外,在300μmol/(m2·s)光强下,总蛋白质和总碳水化合物含量分别最高达到总干重的20.89%和37.43%。(3)克里藻(Klebsormidium sp.JNU41)是一株气生丝状微藻,隶属于链藻门、克里藻纲、克里藻属。对其采用改良的BBM与BG11培养基,设置三组光强(100、300和双侧300μmol/(m2·s))和6种初始氮浓度(3、6、9、12、15和18 mmol/L)对克里藻进行培养。在m BBM培养基、双侧300μmol/(m2·s)光强、6 mmol/L初始氮浓度条件下,最高生物量达到8.38 g/L;总碳水化合物含量最高达到总干重的36.96%。在m BG11培养基、双侧300μmol/(m2·s)光强、3 mmol/L初始氮浓度条件有利于油脂和脂肪酸的积累,最高总脂含量达到总干重的55.12%。脂肪酸的主要成分为棕榈酸、油酸、亚油酸和亚麻酸,其中亚油酸最高相对含量占总脂肪酸的65.87%;最高绝对含量占总干重的30.21%;总蛋白质含量最高达到总干重的37.69%;15 mmol/L初始氮浓度条件有利于叶黄素积累,最高含量达到总干重的1.64 mg/g。(4)通过比较不同丝状微藻在不同条件下总油脂单位体积产率,筛选出最佳藻株为克里藻,最优培养条件为双侧300μmol/(m2·s)光强,m BBM培养基中6 mmol/L初始氮浓度。对其进行平板反应器放大培养,得到最高生物量为5.34 g/L。在油脂提取优化实验中发现,在超声波预处理下,提取溶剂为10%DMSO无水乙醇:正己烷(1:2,v/v)时效果最佳,提取率为82.31%。对油脂进行扩大提取后,对其进行抗氧化性以及自由基清除实验,发现克里藻藻油的抗氧化性及清除自由基能力与浓度呈正相关关系,在清除ABTS+和OH-自由基方面表现出较强的能力。总体来说,克里藻有较强光合作用效率,生长快、易培养、易收获,能获得具有竞争力的油脂和亚油酸产率,有望成为大规模生产亚油酸的新植物资源。
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