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研究背景和目的:肠易激综合征(IBS)患者内脏疼痛的病理生理机制尚不清楚,但一系列的研究表明新生期应激会使IBS的内脏痛敏风险增加。前期研究表明,新生期母爱剥夺(Neonatal maternal deprivation,NMD)大鼠在6周龄时不会发生内脏痛敏,但成年期应激复合NMD应激是否会导致内脏痛敏尚不清楚。本研究的目的是确定大鼠NMD 6周后复合成年应激是否会诱发内脏痛敏,并探讨肾上腺素能系统及P2X3受体在应激导致的内脏痛敏中的作用。实验方法:1.利用新生期母爱剥夺(NMD)和成年多重应激(Adult multiple stresses,AMS)建立慢性内脏痛的大鼠模型。2.通过检测结直肠扩张(Colorectal distension,CRD)的阈值和腹壁撤回评分(Abdominalwithdrawal reflex scores,AWR scores)来评估大鼠内脏痛敏的程度。3.通过ELISA测定血浆中去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)的水平。4.通过Western blotting、Real-time qPCR以及免疫荧光技术对β2肾上腺素能受体(β2 adrenergic receptor，β2-AR)和 P2X3 受体(P2X3 receptor,P2X3R)的表达进行定量和定位分析。5.运用全细胞膜片钳技术记录结直肠相关背根神经节神经元细胞的兴奋性及ATP电流。6.运用钙成像技术检测NE对ATP引发的钙信号的作用。实验结果:1.NMD大鼠在AMS终止后6h和24h出现内脏痛敏反应,全细胞膜片钳记录显示,NMD+AMS的大鼠结直肠相关背根神经节(T13-L2 DRGs)神经元的兴奋性显著增强。2.NMD+AMS大鼠血浆NE水平显著升高,结直肠相关DRGs中β2-AR在蛋白和mRNA水平上的表达显著升高;给予β2-AR拮抗剂(Butoxamine,B口TO)显著翻转了 NMD+AMS大鼠的内脏痛敏和结直肠相关DRGs神经元的超兴奋反应。3.NMD+AMS显著增加了结直肠相关DRGs中P2X3R的蛋白表达量和神经元ATP电流的密度,给予P2X3R拮抗剂A317491显著翻转了 NMD+AMS的内脏痛敏。4.β2-AR和P2X3R在结直肠相关DRGs神经元中共表达;给予β2-AR拮抗剂(Butoxamine,BUTO)显著翻转NMD+AMS大鼠中P2X3R的蛋白表达和结直肠相关DRGs神经元的ATP电流密度。5.NE显著增加对照组大鼠结直肠相关DRGs神经元ATP诱发的钙信号。结论:新生期母爱剥夺复合成年多重应激增强了去甲肾上腺素能系统,通过初级感觉神经元的β2-AR调控P2X3R的蛋白表达,从而增加结直肠相关DRGs的神经元兴奋性,诱发内脏痛敏反应。