ACE2激动剂对Ang II诱导下的肺动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

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【目的】  通过研究ACE2激动剂对Ang II诱导下的肺动脉血管平滑肌细胞增殖影响,探讨ACE2激动剂在减轻肺血管重塑中的作用,为ACE2激动剂的临床使用奠定理论基础。  【方法】  1.Ang II诱导下的肺动脉血管平滑肌细胞培养及筛选  肺动脉血管平滑肌细胞为既往本实验室购自美国细胞库(货号为:3110),直接复苏细胞3-6代用于本实验。将不同浓度的Ang II加入肺动脉血管平滑肌细胞中共培养,采用CCK-8法筛选出Ang II作用于肺动脉血管平滑肌细胞最佳浓度和最佳时间。  2.ACE2激动剂浓度的筛选  将不同浓度的ACE2激动剂Resorcinolnaphthalein(以下简称ACE2激动剂)加入Ang II诱导下肺动脉血管平滑肌细胞中共培养,显微镜下观察各组细胞形态,采用CCK-8法测定各组细胞增殖活力,得出在浓度为25uMol/L的ACE2激动剂为最佳浓度。  3.ACE2激动剂对Ang II诱导下的肺动脉血管平滑肌细胞增殖的影响  将浓度为25uMol/L的ACE2激动剂加入肺动脉血管平滑肌细胞中共培养。命名对照组、ACE2激动剂组、Ang II组、ACE2激动剂+Ang II组,采用CCK-8法测定各组细胞增殖活力。  【结果】  1. Ang II作用于肺动脉血管平滑肌细胞增殖的影响:在12h、24h、48h时浓度为10-6 mol/L Ang II对PASMC活性的影响,与对照组表较, 12h的P<0.05, 24h的P<0.001,差异有统计学意义。本实验采用浓度为10-6 mol/L的Ang II与肺动脉血管平滑肌细胞共培养24小时进行实验。  2. ACE2激动剂浓度的筛选:不同浓度ACE2激动剂+Ang II组与对照组相比,细胞活性均升高(P<0.05),与Ang II组相比,Ang II+ACE2激动剂(10uM)组以及 Ang II +ACE2 激动剂(25uM)组细胞活性降低,差别有统计学意义( P<0.05 )。其中, Ang II+ ACE2 激动剂( 25uM )组细胞活性降低最明显(P<0.001)。  3. 细胞形态学观察:对照组细胞生长多数呈长梭形,细胞伸出较长的突起,细胞之间相互接触,部分区域可见典型的“峰-谷”结构,仅见少量的悬浮细胞。Ang II组细胞排列紧密,细胞数量增多,ACE2激动剂组细胞生长状态以及密度与对照组相近,ACE2激动剂+Ang II组与Ang II组比较,细胞数量减少。  4. ACE2激动剂对Ang II诱导下的PASMC增殖的影响:与对照组相比,Ang II组细胞活性明显升高(P<0.001),ACE2激动剂组与对照组相比,细胞活性无明显差别(P>0.05)。与Ang II组相比,ACE2激动剂(25uM)+Ang II组细胞活性明显降低(P<0.001)。  【结论】  Ang II可以提高血管平滑肌细胞的活性,促进肺动脉血管平滑肌细胞增殖。ACE2激动剂可以抑制 Ang II 诱导的肺动脉血管平滑肌细胞增殖。
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