【摘 要】
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背景与目的:胶质瘤是中枢神经系统（CNS）最常见的原发性恶性肿瘤,发病率和死亡率均较高。尽管采取了手术、化疗和放疗等治疗措施,由于肿瘤复发及治疗抵抗等因素,患者的预后仍不理想。为克服现有疗法的局限性,寻找新的药物或治疗方法具有重要的意义。近年来,我国中药单体的抗肿瘤作用备受关注,屡次成为研究的热点。人参皂苷CK（Ginsenoside Compound K,G-CK）是从名贵药材“人参”中提取出来
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背景与目的:胶质瘤是中枢神经系统（CNS）最常见的原发性恶性肿瘤,发病率和死亡率均较高。尽管采取了手术、化疗和放疗等治疗措施,由于肿瘤复发及治疗抵抗等因素,患者的预后仍不理想。为克服现有疗法的局限性,寻找新的药物或治疗方法具有重要的意义。近年来,我国中药单体的抗肿瘤作用备受关注,屡次成为研究的热点。人参皂苷CK（Ginsenoside Compound K,G-CK）是从名贵药材“人参”中提取出来的稀有达玛烷型糖苷化合物。大量研究表明,G-CK具有明确的抗肿瘤作用,但G-CK在胶质瘤中的作用及机制尚未被完全阐明。本研究旨在探究G-CK对胶质瘤的作用及其可能的分子机制,为临床的药物治疗提供实验基础。实验方法:体外培养人胶质瘤细胞系U251和U87,细胞计数试剂盒-8（Cell Counting-8Kit,CCK-8）法探究G-CK对胶质瘤细胞活力的影响。平板克隆实验探究G-CK对U251细胞克隆形成的影响。免疫荧光实验探究G-CK对U251细胞中Ki67表达的影响。细胞损伤愈合实验探究G-CK对U251细胞迁移的影响。蛋白免疫印迹法（Western Blot）探究G-CK对U251和U87细胞中粘着斑激酶（Focal Adhesion Kinase,FAK）、蛋白激酶B（Protein Kinase B,AKT/PKB）磷酸化水平的影响。Western Blot进一步探究表皮生长因子（Epidermal Growth Factor,EGF）、FAK抑制剂（PF-562271）单一处理,以及G-CK+EGF、PF-562271+EGF共孵育对胶质瘤细胞中FAK/AKT信号通路的影响。最后CCK-8法检测G-CK对EGF诱导的促细胞增殖效应的影响。实验结果:1.G-CK显著抑制U251和U87细胞的活力,且呈浓度依赖性和时间依赖性方式,随着浓度增加或作用时间的延长,药物组吸光度逐渐降低,相比于对照组,具有统计学差异（P＜0.05）。G-CK显著抑制U251细胞克隆形成,随着浓度增加,克隆形成的数目逐渐减少、尺寸也变小,相比于对照组,具有统计学差异（P＜0.05）。G-CK可抑制U251细胞中Ki67表达,随着浓度增加或作用时间的延长,Ki67荧光的数量减少、强度也逐渐地减弱,相比于对照组,具有统计学差异（P＜0.05）。2.G-CK显著抑制U251细胞的迁移,随着浓度增加或作用时间的延长,对迁移抑制作用愈明显,相比于对照组,具有统计学差异（P＜0.05）。3.G-CK不同时间处理U251和U87细胞,Western Blot检测相关蛋白的表达,结果显示,随着作用时间的延长,FAK和AKT磷酸化水平逐渐下降,相比于对照组,具有统计学差异（P＜0.05）。接着,在存在或不存在EGF的情况下,分别用G-CK和PF-562271进一步处理细胞,结果显示,EGF上调FAK和AKT磷酸化基础水平,而G-CK显著抑制了胶质瘤细胞中EGF诱导的FAK/AKT磷酸化途径的激活,具有统计学差异（P＜0.05）。4.最后,采用PF-562271与EGF处理U251和U87细胞,CCK-8法检测细胞活力,结果显示,EGF具有明显的促细胞增殖效应,而EGF增强的细胞活力可被G-CK显著地抑制,相比于对照组,具有统计学差异（P＜0.05）;同样地,PF-562271阻断FAK活性并抑制了EGF诱导的细胞增殖,相比于对照组,具有统计学差异（P＜0.05）。结论:1.G-CK可显著抑制胶质瘤细胞增殖,且呈一定的浓度-时间依赖性方式。2.G-CK抗胶质瘤细胞增殖的机制可能与FAK/AKT信号通路有关。3.G-CK抗肿瘤作用明确,有望用于胶质瘤的治疗。
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