【摘 要】
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目的:1.评价天香丹预处理对tBHP诱导损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的影响。2.从分子水平和Nrf2/ARE通路角度探讨天香丹抗氧化损伤的具体机制。方法:MTT法筛选tBHP和天香丹浓度,随后按照筛选出的药物浓度将HUVECs分为对照组、模型组、维生素C组（浓度为50μg/m L）和天香丹低、中、高剂量组（浓度分别为30、60、90μg/m L）,其中维生素C组和天香丹低、中、高剂量组各
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目的:1.评价天香丹预处理对tBHP诱导损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的影响。2.从分子水平和Nrf2/ARE通路角度探讨天香丹抗氧化损伤的具体机制。方法:MTT法筛选tBHP和天香丹浓度,随后按照筛选出的药物浓度将HUVECs分为对照组、模型组、维生素C组（浓度为50μg/m L）和天香丹低、中、高剂量组（浓度分别为30、60、90μg/m L）,其中维生素C组和天香丹低、中、高剂量组各加入对应浓度含药无血清培养液预处理12h,对照组和模型组则加入等量无血清培养液预处理12h,随后弃去培养液,除对照组外各组加入240μmol/L tBHP作用24h。微板法和WST法检测各组细胞LDH活性、GSH含量和SOD活力值;Elisa法检测各组细胞8-OHd G、e NOS表达情况;Hoechst 33258和JC-1检测各组细胞凋亡情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡率及ROS含量;RT-qPCR和Western blot法检测各组细胞e NOS、Caspase 3及Nrf2/ARE通路中m RNA及相关蛋白表达情况。结果:1.经tBHP作用24h后,模型组细胞存活率、SOD活力、GSH和e NOS的含量、线粒体膜电位较对照组均有明显降低（P＜0.05）,LDH释放量、凋亡率和8OHd G含量明显升高（P＜0.05）,经维生素C和各剂量天香丹预处理后,与模型组相比较,各组细胞存活率、SOD活力、GSH和e NOS的含量、线粒体膜电位均明显升高（P＜0.05）,LDH释放量、凋亡率以及8OHd G含量明显降低（P＜0.05）。2.RT-qPCR和Western blot结果显示,相较对照组,模型组Keap1蛋白表达有所升高（P＜0.05）,Nrf2及通路下游CAT、NQO1、HO-1、GCLM等抗氧化因子m RNA及相应蛋白表达有所降低（P＜0.05）,经维生素C及各剂量天香丹预处理后,各组细胞Keap1 m RNA及其蛋白表达降低（P＜0.05）,Nrf2及通路下游抗氧化因子CAT、HO-1、NQO1、GCLC、GCLM m RNA及相关蛋白表达升高（P＜0.05）。结论:天香丹可通过激活Nrf2/ARE信号通路,促进抗氧化因子的表达,提高HUVECs抗氧化能力,并部分逆转tBHP诱导的细胞凋亡,减轻细胞氧化损伤,从而改善冠脉微循环障碍。
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