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目的:探讨对培美曲塞耐药的胰腺癌Patu8988细胞株相对于亲本细胞在生物学行为、细胞周期以及耐药相关基因CD44、XIAP表达上的差异。针对耐药基因XIAP,探讨XIAP小分子抑制剂Embelin在无生物学毒性剂量下能否提高耐药株的药物敏感性,为在临床上干预肿瘤化疗耐药提供实验依据。
方法:采用活细胞计数法(CCK-8)检测亲本株和耐药株的增殖。细胞周期试剂盒检测亲本株和耐药株的细胞周期分布。细胞黏附实验检测两种细胞株的黏附能力差异。RT-RCR检测CD44 mRNA、Embelin作用亲本株和耐药株前后XIAP mRNA的表达。流式细胞仪检测CD44膜蛋白的表达情况。Western blot检测Embelin作用亲本株和耐药株一定时间前后XIAP蛋白的表达。CCK-8法检测Embelin对亲本株和耐药株增殖的影响及测定单用培美曲塞和联合培美曲塞和Embelin分别对两种细胞的IC50影响。流式细胞仪分析在耐药细胞中单用培美曲塞组和联合使用培美曲塞和Embelin组凋亡差异。
结果:耐药细胞株增殖周期较亲本株延长、黏附能力增强。CD44、XIAP的mRNA和蛋白水平在耐药细胞株中呈高表达。CCK-8结果显示Embelin能抑制耐药株和亲本株增殖,具有浓度依赖性,在浓度<2.5μg/mL时对细胞基本无作用。联合培美曲塞与2.5μg/mL浓度的Embelin作用48h,相对于单用培美曲塞,亲本细胞IC50无明显变化,而耐药细胞株IC50的降低。Embelin作用亲本株和耐药株后耐药株XIAP mRNA和蛋白均有不同程度的下调,而亲本株XIAP的表达无明显改变。Embelin流式细胞分析在耐药细胞中加入培美曲塞联合Embelin干预组凋亡比例高于单用培美曲塞组。
结论:1、胰腺癌培美曲塞耐药细胞株在生物学行为上与亲本株相比有不同程度的差异,主要表现在其增殖、黏附、集落生成能力增强,侵袭、转移能力减弱。2、胰腺癌培美曲塞耐药细胞株和亲本株相比,CD44、XIAP基因的mRNA和蛋白表达水平均有不同程度的上调。3、无生物学毒性剂量下小分子Embelin(2.5μg/mL)能提高对培美曲塞耐药Patu8988细胞株对培美曲塞的敏感性,而对其亲本细胞株无明显的影响。