凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）是非常重要的乳酸发酵菌株。在遗传转化过程中，较厚的细胞壁是限制其转化效率的主要因素。本课题结合了原生质体制备和电转化方法，建立了原生质体电转化法，提高了B.coagulans转化效率。另外还探索性地研究了聚乙烯亚胺(PEI)-质粒DNA纳米粒子对转化效率的影响。　　首先以原生质体制备率和再生率为导向，优化了原生质体制备体系，分别考察了菌龄、酶浓度、酶解时间、酶解温度和渗透压稳定剂对制备率和再生率的影响。发现在B.coagulans ATCC7050生长对数期后期制备原生质体，溶菌酶浓度0.20mg/mL、酶解时间10min、酶解温度37℃，并以0.5M山梨醇和0.5M甘露醇作为渗透压稳定剂其制备率和再生率达到最佳，分别为97.87％和14.01％。　　在此基础上建立了B.coagulans ATCC7050原生质体电转化方法，并优化了其电转条件，包括原生质体浓度、电击参数、质粒数量、复苏时间、质粒大小等。结果以最佳状态的原生质体为对象，原生质体浓度约为5×1010cfu/mL(OD600为25)，固定电场强度8kV/cm，时间5ms，加入700ng pNW33N质粒，电击后复苏2h，所获得的最高转化率为1.17×103cfu/μgDNA，达到细胞直接电转法的3.5倍。　　最后在优化的原生质体电转化方法的基础上，按N/P为3的比例制备聚乙烯亚胺(PEI)-质粒DNA纳米颗粒进行电转化。结果表明，当转化较大质粒(pIM1773-cas9n，8644bp)时，聚乙烯亚胺处理后转化效率是未处理质粒DNA转化效率的9.09倍。