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大量资料表明苦荞麦是我国宝贵的资源之一,本研究以苦荞麦蛋白粉为原料提取苦荞麦活性肽,对提取条件及影响因素进行了优化,确定了最佳提取条件;对其进行分离纯化;研究了苦荞麦活性肽的氨基酸组成、分子量及清除O2-能力等相关理化性质;通过动物试验,研究了苦荞麦活性肽的抗氧化性和降血糖功能。试验结论如下:
(1)最佳提取条件的确定:采用单因素试验和正交试验方法,研究AS1.398中性蛋白酶和2709碱性蛋白酶水解苦荞麦蛋白粉提取苦荞麦活性肽的最佳酶解工艺。试验结果表明:2709碱性蛋白酶提取苦荞麦活性肽优于AS1.398中性蛋白酶;2709碱性蛋白酶提取苦荞麦活性肽的最佳提取条件为:温度45℃、pH11、酶量60U/g、时间14h,极差值分析反映出影响苦荞麦活性肽蛋白质提取率的各因素的排列顺序为;酶量>温度>pH>时间,在此条件下蛋白质提取率可达74.5%。
(2)苦荞麦活性肽的理化性质研究:以SephadexG-25柱层析纯化苦荞麦活性肽,毛细管电泳确定其纯化效果,采用氯化硝基四氮唑蓝(NBT)光还原法研究其抗氧化作用,高效液相凝胶色谱(HPLC)确定分子量,氨基酸自动分析仪测定其氨基酸组成。结果表明:苦荞麦活性肽经SephadexG-25层析后能得到粗分离;苦荞麦活性肽对超氧阴离子自由基有很强的清除作用,清除率达到37.12%;苦荞麦活性肽的相对分子量集中在100-1000Da;氨基酸组成分析表明,苦荞麦活性肽由17种氨基酸组成,含有7种人体必需氨基酸(Val、Ile、Leu、Phe、Met、Thr、Lys),占苦荞麦活性肽氨基酸总含量的31.11%,因此,苦荞麦活性肽具有较高的营养价值和较强的保健功能。
(3)苦荞麦活性肽的动物试验表明:采用两种体外动物试验模型研究了苦荞麦活性肽的抗氧化作用和降血糖功能。用给大鼠注射四氧嘧啶人为引起其血糖升高后,预先给予苦荞麦活性肽的大鼠,其血糖升高值明显低于未给予苦荞麦活性肽的对照组,其中给予高浓度苦荞麦活性肽组大鼠血糖降低幅度最大,可达17.59%;从而说明,预防性给予苦荞麦活性肽溶液,能起到降低血糖的作用,因而对四氧嘧啶所致的糖尿病具有一定的预防作用,但尚不能使其血糖降低至正常水平。饲喂苦荞麦活性肽后,鼠肝脏、心脏和脑中丙二醛(MDA)含量明显降低,其中50%浓度的苦荞麦活性肽溶液对脑中MDA含量降低的效果最为显著。