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目的:研究慢性HBV感染不同阶段肝组织HBVcccDNA定量与Th1/Th2的相关性,探讨机体不同免疫状态对HBVcccDNA的影响。方法:收集40例慢性HBV感染者及10例正常对照肝组织标本。所有病例诊断符合中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会2000年9月西安联合修订的《病毒性肝炎防治方案》。根据慢性HBV感染不同阶段分为4组。免疫耐受期11例,免疫清除期11例,低(非)复制期8例,再激活期10例。采用real-time PCR方法检测外周血、肝组织HBVDNA和肝组织HBVcccDNA,采用免疫组织化学方法检测肝组织IL-10、IFN-γ的分布和表达情况。结果:1对慢性HBV感染不同阶段肝组织HBVcccDNA定量与肝组织IFN-γ、IL-10的表达进行Spearman相关分析肝组织HBVcccDNA定量与肝组织IFN-γ的表达在免疫清除期、再激活期呈负相关,相关系数分别为r=-0.693,P<0.05;r=-0.666,P<0.05。而在免疫耐受期、低(非)复制期无相关,P>0.05。肝组织HBVcccDNA定量与肝组织IL-10的表达在免疫耐受期、免疫清除期、低(非)复制期、再激活期均呈正相关,相关系数分别为r=0.866,P<0.01;r=0.693,P<0.05;r=0.744,P<0.05;r=0.701,P<0.05。2按ALT升高情况分为ALT≥2×ULN组、40≤ALT<2×ULN组,对二组肝组织HBVcccDNA定量与肝组织IFN-γ、IL-10表达进行Spearman相关分析当ALT≥2×ULN时,肝组织HBVcccDNA定量与IFN-γ呈负相关,r=-0.828,P<0.05。而当40≤ALT<2×ULN时,无相关,P>0.05。当ALT≥2×ULN时,肝组织HBVcccDNA定量与肝组织IL-10呈正相关,r=0.828,P<0.05。而当40≤ALT<2×ULN时,无相关,P>0.05。3慢性HBV感染不同阶段肝组织IL-10、IFN-γ的表达免疫组织化学染色显示:正常肝组织未见IL-10表达。慢性HBV感染者肝细胞可见IL-10表达,阳性细胞主要位于肝细胞膜及胞浆内,呈棕黄或深棕黄色细颗粒状。慢性HBV感染各组与正常肝组织比较,IL-10阳性细胞明显增多,染色强度增强,表达较正常对照组明显增强(32.27 vs 8.00,27.64 vs 8.00,32.00 vs 8.00,28.00 vs 8.00)P<0.01。慢性HBV感染各组之间比较无显著性差异,P>0.05。正常肝组织未见IFN-γ表达,慢性HBV感染者肝细胞可见IFN-γ表达,阳性细胞主要位于肝细胞胞浆,少见于肝细胞核,呈棕黄色染色或棕黄色、深棕黄色细颗粒状。慢性HBV感染各组IFN-γ与正常肝组织比较,IFN-γ阳性细胞明显增多,染色强度增强,表达较正常对照组明显增强(21.14vs 10.00,39.18 vs 10.00,21.25 vs 10.00,34.15 vs 10.00)P<0.01。免疫清除期、再激活期肝细胞胞浆可见IFN-γ表达增强,位于胞浆和细胞核。IFN-γ在炎症坏死区的肝细胞浆中表达明显增强。免疫清除期、再激活期肝组织IFN-γ的表达高于免疫耐受期、低(非)复制期,P<0.05。而免疫清除期与再激活期、免疫耐受期与低(非)复制期IFN-γ的表达无显著性差异,P>0.05。免疫耐受期肝组织IL-10表达较IFN-γ增强(14.68 vs 8.32)P<0.05。免疫清除期肝组织IFN-γ的表达较IL-10增强(14.27 vs 8.73)P<0.05。低(非)复制期、再激活期IFN-γ、IL-10表达无显著性差异,P>0.05。4慢性HBV感染不同阶段肝组织HBVDNA、HBVcccDNA的含量比较慢性HBV感染肝组织HBVDNA定量为6.68×10~2拷贝/mg—5.40×10~7拷贝/mg,肝组织HBVcccDNA定量为1.00拷贝/mg—8.88×105拷贝/mg。免疫耐受期、免疫清除期、低(非)复制期、再激活期肝组织HBVDNA均为阳性, HBVcccDNA在四组中阳性例数分别为11/11、11/11、5/8、9/10。免疫耐受期、免疫清除期、低(非)复制期、再激活期肝组织HBVDNA定量平均秩次分别为32.09、26.00、10.63、9.60,HBVcccDNA定量平均秩次分别为30.45、28.00、6.94、12.15。肝组织HBVDNA在免疫耐受期和免疫清除期较低(非)复制期、再激活期明显增高,P<0.01,免疫耐受期与免疫清除期、低(非)复制期与再激活期,均无显著性差异,P>0.05。肝组织HBVcccDNA两两比较结果与肝组织HBVDNA相同。5慢性HBV感染不同阶段外周血HBVDNA的含量比较慢性HBV感染外周血HBVDNA定量为1.00拷贝/ml—7.41×10~7拷贝/ml。免疫耐受期、免疫清除期、低(非)复制期、再激活期外周血HBVDNA阳性例数分别为11/11、11/11、0/8、10/10,血清HBVDNA定量平均秩次分别为28.36、30.55、4.50、13.60。免疫耐受期、免疫清除期、再激活期较低(非)复制期明显增高,P<0.01,免疫耐受期、免疫清除期较再激活期明显增高,P<0.01。6对慢性HBV感染者肝组织HBVcccDNA定量与血清、肝组织HBVDNA定量进行Spearman相关分析慢性HBV感染者肝组织HBVcccDNA定量与血清HBVDNA、肝组织HBVDNA定量均呈正相关,相关系数分别为r=0.842,P<0.001,r=0.856,P<0.001。肝组织HBVDNA定量与血清HBVDNA定量呈正相关,r=0.779,P<0.001。结论:1慢性HBV感染不同阶段机体免疫状态不同,与肝组织HBVcccDNA关系不同。在免疫清除期、再激活期IFN-γ表达较免疫耐受期、低(非)复制期增强,机体的细胞免疫反应较强,HBVcccDNA随着IFN-γ的升高而降低,提示IFN-γ在免疫清除期、再激活期可能参与HBVcccDNA的清除;在免疫耐受期、免疫清除期、低(非)复制期、再激活期肝组织HBVcccDNA定量与肝组织IL-10均呈正相关,HBVcccDNA与IL-10增高具有一致性,说明IL-10的升高可能与乙肝病毒慢性持续感染密切相关。当ALT≥2×ULN时,肝组织IFN-γ表达明显高于40≤ALT<2×ULN,且HBVcccDNA与肝组织IFN-γ表达呈负相关,我们认为机体免疫应答已经启动,有利于病毒的清除,适合抗病毒治疗。2慢性HBV感染存在Th1/Th2失衡。主要表现在免疫耐受期和免疫清除期。在免疫耐受期中Th2占优势;在免疫清除期中Th1占优势。3通过比较肝组织HBVcccDNA定量、血清HBVDNA、肝组织HBVDNA定量发现:低(非)复制期血清HBVDNA均阴性,而肝组织中HBVDNA均阳性,HBVcccDNA部分(5/8)阳性,表明当血清HBVDNA低于检测水平以下时,肝组织内HBVDNA、HBVcccDNA仍存在,故不能以血清HBVDNA推测肝组织中HBVDNA、HBVcccDNA的水平。肝组织HBVDNA、HBVcccDNA定量可反映体内HBV感染及复制情况,是较血清HBVDNA更可靠的指标。