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目的:以典型虚寒证和虚热证患者为研究对象,以前期基因表达谱筛选的候选差异基因为目标,通过实时荧光定量PCR技术检测这些候选差异基因的表达,探讨中医虚寒、虚热证型之间能量代谢的差异,进一步揭示其典型的证候特征与基因异常表达之间的关系,探索环境温度的改变对不同证型机体产能功能的影响及规律,以期在分子层面探索能量代谢异常与虚寒、虚热证发生的相关性,为微观层次揭示虚寒、虚热证的科学内涵奠定基础。 方法:利用《中医体质量表》对河南中医学院在校大学进行中医体质调查,分析在校大学体质的分布,通过专家诊断筛选出典型虚寒证、虚热证和正常对照组各20人;利用实时荧光定量PCR技术分别对各组人群在两种温度(低温-4℃~5℃、室温23℃~25℃)下P2X5受体、SLC4A8、补体C5、FABP6、PEPP1及异柠檬酸脱氢酶的IDH1、IDH2、IDH3A、IDH3B和IDH3G等十条基因进行相对定量。采用SPSS17.0软件对数据进行统计学处理,三组之间的比较用方差分析,同组内两种温度之间的比较采用配对t检验。 结果: 1.中医体质的流行病学调查结果:八种偏颇体质(单纯偏颇质与兼夹偏颇质之和)的分布为:气虚质占29.3%;阳虚质占25.2%;阴虚质占24%;痰湿质占13.4%;湿热质占9.9%;瘀血质占14.1%;气郁质占18.6%。对阳虚、阴虚质的进一步分析:阳虚体质758人(25.2%),其中女生332人,男生426人,男女生分布没有统计学差异。其主要的特征表现为手脚发凉、怕冷多衣、不耐寒冷。阴虚体质722人(24%),其中女生310人,男生412人,男女生分布具有统计学差异。其主要的特征表现为口唇干燥、眼睛干涩、口干咽燥欲饮水。 2.P2X5受体的基因表达情况:1)组间比较:在室温状态下,虚寒证、虚热证P2X5受体表达均低于正常组,差异有统计学意义;在低温状态下,正常组与虚寒证之间、虚寒证与虚热证之间差异有统计学意义。2)组内比较:三组组内P2X5受体在两种温度下的表达均无统计学意义。 3.SLC4A8基因的表达情况:1)组间比较:无论室温或是低温环境下,虚寒证SLC4A8基因的表达均高于其他两组,在低温环境下,虚寒证与正常组比较差异具有统计学意义;2)组内比较:三组人群在不同环境下,虚寒与虚热证组SLC4A8基因为:低温值>室温值,正常组为低温值<室温值,差异均无统计学意义。 4.IDH的表达:(1)IDH1基因的表达:1)组间比较:三组IDH1基因的表达量均表现为:正常组<虚寒证<虚热证。在室温下,虚寒证与虚热证的表达量高于正常对照组,差别具有统计学意义;在低温环境下,虚热证与正常对照组比较差异具有统计学意义;2)组内比较:IDH1基因在同组内不同温度下表达量均表现为:室温>低温,虚热证低温与室温比较差异具有统计学意义,正常对照组和虚寒证低温与室温比较差异无统计学意义。(2)IDH2基因的表达:1)组间比较:不论在低温或是室温下,与正常对照组比较,虚寒证与虚热证的表达量降低,表现为:正常组>虚寒证>虚热证,但差别均无统计学意义;2)组内比较:与室温下IDH2基因的表达比较,正常组、虚寒证和虚热证组的IDH2基因低温下的表达量均较低,但差别均无统计学意义。(3)IDH3A基因的表达:1)组间比较:在低温和室温下,虚寒证组较正常组均低,其中在低温环境下,与正常组和虚热证比较差异均具有统计学意义。2)组内比较:与室温相比,正常组与虚寒证组IDH3A基因在低温下较低,且虚寒证组两种温度的比较差异有统计学意义,正常组与虚热证低温和室温的比较差异无统计学意义;(4)IDH3B基因的表达:1)组间比较:在室温下,虚寒证的表达较正常组与虚热证两组高,且差异均具有统计学意义,正常组与虚热证比较差异无统计学意义;2)组内比较:正常组和虚寒证室温下IDH3B基因的表达高于低温,其中虚寒证 IDH3B基因低温与室温的比较差异具有统计学意义。虚热证低温下 IDH3B基因表达量略高于室温,但差异无统计学意义。(5)IDH3G基因的表达:1)组间比较:在室温环境下,与正常组比较,虚寒证和虚热证IDH3G基因的表达差异均无统计学意义;其中虚寒证的表达较其他两组高,且与虚热证差异具有统计学意义;在低温环境下,虚寒证的表达最低,IDH3G基因的表达量为:虚热证>正常组>虚寒证,差异均无统计学意义。2)组内比较:正常组和虚寒证组低温下IDH3G基因的表达较室温下偏低,差异均有统计学意义,表现为:室温>低温。而虚热证表现为低温>室温,但是差异无统计学意义。 5.补体 C5基因的表达情况:1)组间比较:在室温下,补体 C5基因在三组的表达为:虚寒证>正常组>虚热证,三组之间的比较差异均具有统计学意义;在低温下,补体 C5基因的三的三组表达为:虚热证>正常组>虚寒证,但差异均无统计学意义;2)组内比较:补体C5在正常组与虚寒证低温下的表达均低于室温,且虚寒证低温与室温的比较差异具有统计学意义;虚热证补体C5在低温下的表达则高于室温,但是差异无统计学意义。 6.FABP6基因的表达情况:1)组间比较:在室温下,FABP6基因在虚寒证的表达高于其他两组,虚热证的表达最低。其中,虚热证与正常组比较、与虚寒证比较差异均有统计学意义,虚寒证与正常组比较差异无统计学意义;在低温下FABP6基因在三组表达为:虚热证>虚寒证>正常组,但三组比较差异均无统计学意义;2)组内比较:正常组和虚寒证低温下均低于室温的表达,且差异具有统计学意义;虚热证在低温下的表达高于室温,但差异无统计学意义。 7.PEPP1基因的表达情况:1)组间比较:在室温下,PEPP1基因在三组的表达为:正常组>虚寒证>虚热证;在低温下,三组的表达为:虚寒证>正常组>虚热证,差异均无统计学意义。2)组内比较:同组内在两种温度下均表现为低温>室温,差异均无统计学意义。 结论: 1.根据八种偏颇体质的分布情况,加强对在校大学生体质问题的关注。根据各种体质所特有的特征表现,依据其发病倾向,对偏颇体质进行干预,以便做到“治未病”。 2.虚寒证、虚热证的典型证候特征可能与P2X5、SLC4A8的异常表达有关; 3.异柠檬酸脱氢酶基因各亚型在虚寒证、虚热证患者体内表达各异。两组患者机体产能的关键基因表达存在异常,同时存在H+的外流,可能与其证候特征有关。 4.虚寒证患者补体 C5在低温下的异常表达提示,其免疫防御功能可能降低导致虚寒证患者在低温下易受寒邪侵袭,出现阳虚的表现。 5.FABP6基因和PEPP1基因的异常表达与虚寒证、虚热证典型证候特征之间的关系有待进一步的研究。 6.由于基因功能不同,对温度的敏感度也存在差异,其内在机理有待研究;温度变化对机体能量代谢的影响尚有待进一步的明确。