血小板是调控机体生理性止血的重要细胞,血小板功能异常会导致机体出现相应的出血或血栓性疾病,因此,探究血小板活化的分子机制,对于治疗出凝血功能异常的疾病至关重要。血小板的活化与细胞骨架动力学紧密相关,以往的研究认为,WDR1是肌动蛋白解聚因子ADF/cofilin的重要调控因子,促进ADF/cofilin介导的F-actin的解聚。F-actin能够激活血小板,引起血小板的聚集、活化,从而形成微血栓阻塞血管。影响肌动蛋白细胞骨架的动态变化,在抑制血小板活性方面发挥重要作用,参与血小板介导的出凝血异常等相关疾病的发生。蛋白质的翻译后修饰是保证其功能正常行使的前提,泛素化修饰是维持细胞蛋白质正常水平和活性的重要翻译后修饰类型。底物蛋白泛素化修饰后一部分进入蛋白酶体途径降解,另一部分蛋白经泛素化修饰后改变活性状态。WDR1可被EYA3去磷酸化,导致细胞内肌动蛋白产生异常,从而影响细胞骨架动力学。但是,关于WDR1的泛素化修饰及其对血小板生物学功能的影响仍不清楚。RNF8是具有RING结构域的E3泛素连接酶,在本研究中,我们推测RNF8通过泛素化修饰WDR1并调控其降解,从而参与血小板肌动蛋白骨架的动态变化,进而影响血小板的功能。本研究中,我们利用泛素连接酶RNF8基因敲除小鼠,补充了RNF8对WDR1的泛素化修饰作用及对血小板活性的影响。结果发现:（1）RNF8基因敲除小鼠的血小板数量明显减少。（2）血栓弹力图表明RNF8基因敲除小鼠的血小板MA值减小,提示血小板的聚集功能存在异常。（3）未加激活抑制剂提取的血小板透射电镜显示,RNF8-/-小鼠血小板内部致密颗粒数量增多,提示致密颗粒的分泌减少,血小板的活化可能存在异常。（4）尾出血试验发现RNF8-/-小鼠尾出血时间延长,出血量增加。（5）在使用全血微灌流模拟体内血液流动的体外血栓形成实验中,我们发现,在模拟的循环血流匀速流动条件下,RNF8-/-小鼠血小板在胶原表面形成血栓的稳定性显著降低;同时,静态粘附实验显示相同数量血小板结合胶原蛋白,RNF8-/-小鼠的血小板粘附数量减少,即血小板粘附能力降低。（6）骨髓HE染色结果显示,RNF8-/-小鼠的骨髓巨核细胞数量代偿性增多、质谱流式检测结果与之一致。（7）我们通过表型筛选和跨组学联合分析发现,RNF8缺失可导致WDR1的表达上调,而泛素化修饰下调;蛋白免疫印迹检测显示RNF8缺失导致WDR1蛋白水平升高;分子对接模拟分析显示RNF8与WDR1存在可能的作用位点;免疫共沉淀结果表明RNF8与WDR1存在相互作用;免疫沉淀实验显示RNF8-/-小鼠中WDR1总泛素化修饰水平降低。综上所述,RNF8是参与血小板活化的重要调控蛋白,RNF8缺失导致小鼠外周血血小板的数量减少、尾出血时间增加,血小板粘附能力下降且致密颗粒释放减少,作用机制为RNF8经泛素化修饰WDR1从而调控cofilin及其下游肌动蛋白骨架动力学,影响血小板活化及功能。