论文部分内容阅读
黏菌作为真核生物中的一个特殊类群,在生物界中占有重要地位。因其独特的兼具动物和真菌某些特征的生活史,使其在生物界中的地位一直没有得到统一。目前黏菌归属于原生动物,但是其究竟是与真菌的亲缘关系近,还是与原生动物的亲缘关系更近,始终是生物分类学者讨论的一个课题。为了建立一个更趋自然的黏菌分类系统,寻找解决传统分类学上较困难的问题,本文采用分子生物学技术对黏菌部分分类单元的肌动蛋白基因和β-微管蛋白基因进行PCR扩增和序列测定,通过序列分析探讨其分子系统学关系。纯培养得到鳞钙皮菌和长发丝菌的原生质团,通过原生质团提取基因组DNA与常规通过子实体提取基因组DNA比较发现,消耗约相同质量的子实体,排除人为操作造成纯培养的污染外,原生质团提取的基因组品质较好,浓度相对较高且没有拖带现象,直接用于后续PCR的效果较好。这种方法将一定程度上解决黏菌子实体量少、难以获得的难题,也是获得较高品质DNA的一种新方法。利用一对引物对黏菌纲内7种黏菌的肌动蛋白基因进行PCR扩增和序列测定,并结合GenBank中6条多头绒泡菌序列进行分子系统学分析。用最大似然Maximum Likelihood (ML)法构建系统发育树。从系统发育关系看出基于肌动蛋白基因基本能够将黏菌纲内无丝菌目、团毛菌目、绒泡菌目和发网菌目区分开来,并且展现出两条并行的分支演化路线,一支由无丝菌目、团毛菌目和绒泡菌目组成,另一支由发网菌目组成。利用一对引物对黏菌纲内7种黏菌的p-微管蛋白基因进行PCR扩增和序列测定,并结合GenBank中2条多头绒泡菌序列进行分子系统学分析。用最大似然Maximum Likelihood (ML)法构建系统发育树。从系统发育关系上看绒泡菌目的鳞钙皮菌先与发网菌目的长发丝菌聚为一个分支,之后才与同目的白柄菌再聚为一个较大的分支,这表明该基因并不适合于用作黏菌纲目级水平系统发育的分子指标。推测得到7种黏菌的肌动蛋白和p-微管蛋白氨基酸序列。其中肌动蛋白氨基酸序列种间差异约28%,而p-微管蛋白氨基酸序列种间差异约7%,发现p-微管蛋白比肌动蛋白更加保守。2种蛋白都能较好的将植物、真菌、动物和原生生物区分开来,其中肌动蛋白能够较好的说明黏菌与真菌和动物亲缘关系较近,与传统意义上对黏菌的分类一致；而p-微管蛋白由于过于保守没有较好的反映出黏菌的亲缘关系。