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休眠是多年生木本植物在长期的自然进化过程中形成的对季节性气候变化的生物学适应性。作为一种多年生木本植物,葡萄新梢上的芽包括当年形成即可萌发的的夏芽及保持休眠状态、直到翌年环境条件适宜时才萌发的冬芽这两种着生部位相邻的芽。基于本课题组曾构建的冬芽和夏芽抑制消减cDNA文库,本研究以赤霞珠葡萄冬芽和夏芽为材料,将同源克隆和RT-PCR技术相结合,对部分候选基因进行克隆和生物信息学分析,并利用Real-time PCR技术对不同萌发状态的夏芽及其相邻位置的冬芽中及单氰胺破眠处理不同阶段基因表达模式进行了分析,同时对单氰胺破眠处理不同阶段氮素、抗氧化指标的变化进行分析,为揭示葡萄芽生理休眠及解除的本质奠定基础。主要研究结果如下:1.通过克隆获得了葡萄生长素抑制蛋白基因VvArp的全长序列,VvArp编码的蛋白质中含Auxin-repressed家族的保守结构域,属水溶性非分泌型蛋白,不含信号肽和跨膜结构域。基因表达模式分析结果表明:随着夏芽的萌发,VvArp基因在不同节位的冬、夏芽及在同一节位的冬、夏芽之间表达量大体上呈现显著性差异;另外,VvArp基因在单氰胺破眠处理组和对照组中表达量均呈降低趋势,且在各个阶段的冬、夏芽中均有差异性表达,相对而言,对照组降低幅度较小。2.通过克隆得到了葡萄细胞周期蛋白依赖激酶基因VvCdk,VvCdk编码的蛋白质具有细胞周期蛋白依赖激酶的特征信号序列、保守结构域和细胞周期蛋白依赖激酶的典型三维结构。Real-time PCR检测结果表明,VvCdk基因在夏芽中表达量呈迅速增加趋势,各个状态下基因表达量差异显著,在同一节位的冬芽和夏芽之间其表达量也呈现显著差异,在冬芽中,表达量呈降低趋势;在单氰胺破眠处理后,VvCdk表达量在处理组和对照组中均呈现上升趋势,处理组中表达量前期差异显著,而对照组冬芽中VvCdk表达量在前期差异不显著,后期差异显著。3.通过分析单氰胺破眠处理对冬芽抗氧化指标的影响表明:阴离子自由基(O2￣?)含量呈降低趋势,而过氧化氢(H2O2)含量呈增加趋势,且与对照组相比,单氰胺处理组中二者含量变化幅度较大;对抗氧化相关酶的活性进行分析发现,处理组冬芽中超氧化物歧化酶(SOD)活性随着休眠的解除呈上升趋势,而过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性随着芽休眠解除呈现降低趋势,相对而言,对照组中三种酶活性变化较小。4.通过分析单氰胺破眠处理对冬芽中含氮化合物含量的影响表明:随着冬芽的萌发,总氮、总蛋白、可溶性蛋白含量在对照组和处理组中均呈现增加趋势,相比较而言,对照组中三者含量较低,且随休眠解除增加幅度比较小。