恶性肿瘤是威胁人类健康的主要疾病之一,全世界每年约有700万人新患癌症,约有500多万人死于癌症,因此寻找有效的抗肿瘤药已经成为国内外的主要研究方向。蜂毒素(melittin)是蜜蜂分泌的毒液中分离提取的活性成分,具有较强的抗肿瘤细胞活性[1-2],并对多种人源性肿瘤细胞有着较强的杀伤作用[3]。本实验通过体内、体外实验相结合的实验方法,观察其对细胞周期、免疫学指标的影响,初步探讨其作用机制。为蜂毒素在抗肿瘤方面的临床应用提供依据。主要内容如下:1.蜂毒素的细胞体外筛选及体内试验1.1.蜂毒素的细胞体外筛选:采用MTT法发现蜂毒素在浓度为1、2、4、8、16、32、64μg/ml的剂量下对A549、U2OS、Hep2、HepG2等十种人源肿瘤细胞均有抑制作用,且呈现一定的时间、剂量依赖性关系。其中对人源肝癌细胞抑制更为明显。1.2.蜂毒素的细胞体内筛选通过对H22荷瘤小鼠肿瘤的研究发现蜂毒素对H22荷瘤小鼠肿瘤的生长具有明显的抑制作用;提高荷瘤小鼠的存活时间,且随浓度的增加,作用逐渐增强。提示蜂毒素可能具有较强的抗肿瘤作用。2.蜂毒素对荷瘤小鼠作用的初步研究2.1.蜂毒素对H22细胞细胞周期变化以及凋亡的影响采用流式细胞仪法观察蜂毒素作用H22细胞后细胞周期的变化情况,结果显示蜂毒素可阻断H22细胞S期增殖,同时出现有明显的亚二倍体峰凋亡峰。通过对H22细胞Hochest染色,发现经过染色后的H22细胞呈现明显的凋亡特征。2.2.蜂毒素对荷瘤小鼠免疫功能的研究体内结果显示蜂毒素2、4mg/kg可使荷瘤小鼠低下的ConA诱导的淋巴细胞增殖反应增强,提高淋巴细胞的免疫水平。同时提高荷瘤小鼠的抑瘤率以及生命延长率,提升脾脏指数以及体内的IL-2水平,下调血清中TNF-α含量,提升CD4+、CD8+含量,且呈现一定的剂量依赖性关系。提示蜂毒素抗肿瘤作用可能与增强荷瘤小鼠的免疫功能有关。