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脑源性神经营养因子(BDNF)是一类具有神经调控能力的神经营养因子,对神经细胞存活及生长发育起促进作用;并且其人体内含量最高,受体分布最广,同时能促进其他神经营养因子的释放,增强神经细胞的生存能力。但是,目前应用BDNF治疗疾病存在限制:BDNF无法透过血脑或血眼屏障,因此全身给药后难以到达病变位置;而且其半衰期短,即使局部注射,也需反复注射。因此合适的传递载体是突破BDNF治疗限制的关键。脂肪间充质干细胞(ADSCs)属成体多能干细胞的一种,具有来源丰富、易于提取、无伦理道德问题及多向分化潜能等优点。研究表明ADSCs易于外源目的基因的转入,兼其向损伤部位定向迁移的特性,是.一种良好的传递载体。而且ADSCs的干细胞特性对疾病治疗起协同作用。因此本课题构建了持续表达外源BDNF基因的ADSCs细胞系,实现BDNF基因的持续表达,研究对疾病治疗的作用机制。本课题采用胶原蛋白酶消化法,将获得的ADSCs分离纯化并进行其增殖、表面标志的鉴定及成脂成骨能力测试。ADSCs为长梭形细胞,贴壁旋涡式生长,具有多向分化潜能。表面标志鉴定结果表明其干细胞表面标志阳性表达,而阴性表达造血、吞噬和上皮表面标记物等,符合间充质干细胞鉴定标准。用携带增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因和新霉素(Neo)基因为筛选因子的外源BDNF基因的重组慢病毒转染ADSCs,通过荧光筛选和G418药物筛选,得到稳定细胞株BDNF-ADSCs。流式测试、多向分化能力鉴定及菌落形成单位分析结果表明,BDNF转入未改变其干细胞特性及多向分化潜能。通过ADSCs和BDNF-ADSCs生长曲线对比,转染细胞具有较长的细胞周期,分析主要因外源基因的表达增加了细胞增殖的负担。Real-time PCR测定结果显示BDNF mRNA及相关基因mRNA表达均有不同程度提高,BDNF在体外细胞可以调控相关因子;Western-blot分析得NGF蛋白与BDNF蛋白表达水平均有提高,BDNF基因可以成功在体外ADSCs中表达并发挥促进其它神经营养因子分泌的作用。