正常家兔颈椎椎间盘内神经分布的实验性研究

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目的:颈性眩晕的发病机制比较复杂,在众多的病因中交感神经因素起到了非常重要的作用。然而关于交感神经导致颈性眩晕的具体机制目前还不太清楚。近年来,经皮激光椎间盘减压术治疗颈性眩晕取得了显著的疗效。这意味着颈椎椎间盘和椎动脉之间可能存在着某些必然的联系,而这种联系的中介很可能就是位于椎动脉和椎间盘及其周围组织内的神经纤维,因此颈椎椎间盘内的神经分布情况就成了我们最关注的问题。到目前为止,关于椎间盘神经分布的研究很多,但是这些研究主要集中在腰椎间盘,关于颈椎椎间盘神经分布的研究却很少。研究证实腰椎间盘尤其是退变或突出的腰椎间盘的纤维环外1/3存在着交感神经纤维和感觉神经纤维,腰椎间盘内的感觉神经纤维是由上腰部的背根神经节发出,通过交感神经干、经灰交通支分布到腰椎间盘纤维环的。这些关于腰椎间盘神经分布的研究为关于颈椎椎间盘神经分布的研究提供了可以借鉴的经验。本研究的目的是应用辣根过氧化物酶(HRP)示踪方法和免疫组织化学染色方法,对正常家兔颈椎椎间盘进行研究,观察正常家兔颈椎椎间盘周围是否存在神经纤维,如果存在神经纤维则进一步确定神经的种类,并确定颈椎椎间盘内感觉神经纤维的来源。作为对比,同时进行腰椎间盘神经的免疫组织化学染色。方法:本实验选取15只日本大耳白兔为实验对象,随机将实验动物分为两组进行实验,分别为椎间盘(IVD)组5只和背根神经节(DRG)组10只。1、在椎间盘(IVD)组,选取C5/6颈椎椎间盘标本,制成厚度为5μm的石蜡切片。并进行苏木精-伊红染色,观察颈椎椎间盘的正常组织学形态;选取C6/7颈椎椎间盘标本,石蜡切片,切片厚度为5μm,每个椎间盘切取三张切片,分别进行一般神经标记物神经丝蛋白(NF)、传递伤害性刺激的感觉神经标志物P物质(SP)和交感神经的标志物神经肽Y的C端连接肽(CPON)的免疫组织化学染色。观察正常家兔颈椎椎间盘内神经生长情况。作为对照,同时选取L4/5、L5/6腰椎间盘标本分别进行苏木精-伊红染色和椎间盘免疫组织化学染色。2、背根神经节组分为交感神经完整组(nontreated group)和交感神经切断组(sympathectomized group),每组5只,进行辣根过氧化物酶示踪实验。在交感神经完整组内,保留家兔交感神经的完整性;在交感神经切断组内,于颈部交感干靠近颈下神经节的下方切断交感干。两组分别进行椎间盘后方神经纤维的辣根过氧化物酶神经示踪实验。应用微量注射器在两组实验对象的C4/5、C5/6、C6/7椎间盘后缘注射辣根过氧化物酶。动物存活48小时后将动物处死,取双侧颈部(C4~8)和上胸部(T1~5)脊髓节段的背根神经节,观察神经节内神经元的标记情况。结果:腰椎间盘纤维环周围组织存在着丰富的神经纤维。在腰椎间盘切片中,纤维环后方存在NF免疫反应阳性神经纤维的切片数为4个,阳性率为80%;CPON免疫反应阳性神经纤维的切片数为3个,阳性率为60%;SP免疫反应阳性纤维的切片数为2个,阳性率为40%。同时在腰椎间盘的前方我们也发现了各类免疫反应阳性神经纤维的存在。在颈椎纤维环切片内,颈椎椎间盘纤维环的后方存在NF免疫阳性纤维的切片数为4个,阳性率为80%;颈椎椎间盘纤维环的后方组织内存在COPN免疫阳性纤维的切片数为1个,阳性率为20%;没有发现SP免疫阳性神经纤维的存在。在辣根过氧化物酶示踪实验中,在交感神经完整组和交感神经切断组的背根神经节中,均未发现被HRP标记的神经元胞体。结论:颈椎椎间盘周围存在着神经纤维,其中包括CPON免疫反应阳性的交感神经纤维。颈椎椎间盘周围的神经纤维可能参与了颈性眩晕的发病过程。
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