SL转导基因CsDAD2与GA3互作调控黄瓜分枝发育的研究

来源 :哈尔滨师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sbsiqyd9
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为了生存和繁衍,植物需要适应各种环境的变化,分枝是调节优化植物表型的生命活动之一。独角金内酯(SL)是近年来发现的一种植物激素,具有抑制植物分枝的作用,而赤霉素(GA)也被发现参与芽生长的调节,并且在调节腋芽的生长方面与SL可能存在相互作用。黄瓜是我国重要的蔬菜作物,其产量受到侧枝数目的影响。为了探究SL与GA在黄瓜分枝上的相互作用,本研究对黄瓜进行赤霉素(GA3)处理,检测黄瓜相关基因的表达变化;同时克隆黄瓜SL相关基因CsDAD2,构建过表达载体收获转基因拟南芥株系,检测其相关表型和相关基因的变化,为完善植物激素互作机制,补充黄瓜侧枝生长的调控原理提供研究方向和理论支持。取得的主要结果如下:(1)GA3的处理降低了黄瓜根、叶中SL合成基因CsCCD7的表达,促进了叶腋中CsCCD7的表达;黄瓜茎和叶腋中SL信号通路基因CsD14和CsDAD2在GA3处理后表达明显增加,且CsDAD2在叶腋中的变化更明显。GA3也促进了植物生长发育调节转录因子CsTCP2和分枝抑制因子CsBRC1表达的增加。这些暗示GA3促进SL信号的转导,并对黄瓜的分枝有抑制的作用。(2)使用实时荧光定量PCR探究CsDAD2基因组织表达情况,表明CsDAD2在黄瓜根、茎、叶、叶腋和子叶中均有表达,在根中表达量最高;启动子GUS染色也证明,CsDAD2基因在叶片、叶腋和根中有明显的表达。(3)克隆黄瓜的CsDAD2基因,生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白质为可溶性蛋白,由276个氨基酸组成,不属于分泌蛋白和跨膜蛋白的范畴,具有与野草莓、红皮柳、葡萄等较远的同源关系与进化关系;启动子序列分析表明,该基因可能参与光响应和激素间的相互作用。(4)构建CsDAD2超表达载体,使用花序侵染法导入拟南芥,筛选培育得到CsDAD2超表达转基因拟南芥植株。实时荧光定量PCR检测发现,转基因拟南芥幼苗中GA代谢基因表达降低,信号通路基因表达增高;转基因拟南芥成株中,各组织GA代谢基因的表达也发生降低,而在叶腋中出现了GA信号通路基因增加的现象,推测存在CsDAD2介导的SL与GA信号通路间的互作调节途径。分枝抑制基因AtBRC1表达变化的不同,可能是转基因拟南芥分枝变化的原因之一。以上结果进一步说明SL与GA在植株分枝方面确实具有互作调控的可能,且似乎涉及更为复杂的内部信号运作。
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