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胰腺癌是一种高度恶性的肿瘤，其发生发展与多种基因异常有关，如p53、K-ras、p16INK4A、DPC4／SMAD4、BRCA2等。由于胰腺癌手术切除率低，放、化疗的效果差，探讨新的有效的治疗方法已成为胰腺癌研究的重要方向。我们采用重组腺病毒载体将外源性ARF／INK4a基因导入人胰腺癌细胞系中进行实验性基因治疗。 采用Western blot方法检测我实验室现有7株胰腺癌细胞系的p14ARF和p16INK4a的表达，发现其中PC-4、PC-7、Panc-1和Maia-Paca2的p14ARF和p16INK4a蛋白表达缺失，我们选取PC-7、Panc-1和Maia-Paca2进行转基因实验。 1．利用Hela细胞的mRNA，经RT-PCR得到野生型p14ARF和p16INK4a的cDNA，利用AdEasy重组腺病毒系统，构建复制缺陷型的重组腺病毒质粒pAdp14和pAdp16，经腺病毒包装细胞293细胞的包装、扩增后，得到复制缺陷型腺病毒Adp14和Adp16，分别感染PC-7、Panc-1和Maia-Paca2细胞，经Western Blot和RT-PCR证实各株细胞中有外源性的p14ARF和p16INK4a表达。 2．将Adp14分别感染PC-7、Panc-1和Maia-Paca2细胞，发现有野生型p53的PC-7细胞和p53突变的Maia-Paca2细胞生长速率减慢，G2期细胞比例增加，软琼脂克隆形成率降低，Western blot显示RB蛋白有不同程度去磷酸化，PC-7细胞p53表达上调；而p53突变的Panc-1细胞则未发生上述改变。经TUNEL法和流式细胞术未发现凋亡细胞比例明显上升。提示p14ARF可通过依赖及不依赖p53的途径抑制胰腺癌细胞生长。 3．将Adp16分别感染PC-7、Panc-1和Maia-Paca2细胞，发现这三株细胞的生长速度均减低，出现G1期或G2期细胞比例增加，细胞出现衰老表型，Western blot显示RB蛋白磷酸化程度降低，E2F1表达上调，Panc-1和Maia-Paca2细胞软琼脂克隆形成率降低，经TUNEL法和流式细胞术未发现凋亡细胞比例明显上升。说明p16INK4a通过RB途径抑制胰腺癌细胞生长。 4．在有野生型p53的PC-7细胞中可见Adp14和Adp16细胞生长抑制效果相似，联合使用这两种腺病毒与单独使用某一种病毒相比未见明显优势，Western blot显示与Adp16组相似的蛋白水平变化，TUNEL法和流式细胞术未发现凋亡细胞比例明显上升。