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洋葱是世界上最重要的园艺作物之一,其杂种优势十分明显,选育一代杂交品种是洋葱育种的主要方向。洋葱花器小,单花结籽率低,人工去雄成本高,利用雄性不育系是配制杂交种子的有效途径。本研究采用光镜、电镜、DNA梯度技术和RAPD(随机扩增片段长度多态性DNA)分子标记技术,对江苏省农业科学院蔬菜研究所选育的两套不育系洋葱63A、70的CMS机理进行了初步研究,结果如下: 1、不育系63A及其相应保持系63B的小孢子发生与花药壁发育的显微结构,结果表明: ①花粉母细胞时期,保持系和不育系花药花粉母细胞均发育正常,但不育系花粉囊形状不规则,绒毡层发育迟缓。 ②四分体时期,保持系和不育系四分体形成正常,但两者中层和绒毡层差异较大。保持系中层细胞排列整齐,细胞核清晰可见,绒毡层细胞质浓郁发达;而不育系中层严重退化,绒毡层与药室壁完全脱离,细胞质浓缩、空泡化。 ③小孢子时期,随着小孢子发育成熟保持系中层、绒毡层已逐渐降解,但两者的核清晰可见;此时,不育系小孢子已经出现干瘪现象,聚集在一起,中层、绒毡层完全降解。 ④花粉粒时期,保持系花粉粒发育饱满,中层和绒毡层完全降解。而不育系空壳花粉粘在一起,形成粗线状,药室严重收缩。 2、不育系63A及其相应保持系63B的小孢子发生与花药壁发育的超微结构,结果表明: ①四分体时期,在电子显微镜下观察不育系花药绒毡层出现胞质收缩、染色质浓缩、内质网溢满和线粒体肿胀等细胞程序性死亡(PCD)的特点。 ②小孢子时期,在电子显微镜下观察保持系小孢子形成花粉壁,细胞器发育正常;不育系小孢子开始收缩,细胞器数目大为减少,内质网发育受阻,并出现同心圆结构,核糖体聚集,线粒体数目少,嵴不发达,内外膜解体,花粉内壁发育受阻。 3、不育系63A绒毡层PCD检测: 对不育系四分体时期花蕾DNA电泳检测,结果表明: 不育系四分体时期花蕾DNA可以呈现明显的DNA ladder,而保持系仅出现少量DNA降解。 综上所述,我们推测不育系小孢子败育与作为小孢子发育必不可少的疏导