鲍曼不动杆菌同源性分析与碳青霉烯类耐药机制研究

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目的:本研究通过了解我院鲍曼不动杆菌感染情况、耐药特征与流行趋势,对临床菌株与环境菌株进行同源性分析比较,了解院内是否存在鲍曼不动杆菌播散流行,为控制院内感染提供依据;检测β-内酰胺酶基因与主动外排系统结构基因与调控基因在亚胺培南耐药组(imipenem-resistant Acinetobacter baumannii IRAB)与敏感组(imipenem-sensitive Acinetobacter baumannii ISAB)中分布差异,并对主要外排基因进行表达量分析,深入探讨鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物的耐药机制。  方法:1、本实验收集2011年7月到10月我院临床分离鲍曼不动杆菌共81株,同期对神经外科重症监护病房(ICU)进行环境污染调查采样,在患者病床、桌面、呼吸机表面、房间门把手等部位分离到鲍曼不动杆菌28株。琼脂稀释法检测上述菌株对临床常用13种抗菌药物的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration MIC)。2、采用肠杆菌科基因间重复序列 PCR(enterbacteriat repetitive intergenic consensus ERIC-PCR)与脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis PFGE)对临床分离81株鲍曼不动杆菌和28株环境分离菌株进行基因分型,分析其主要流行型别。3、外排泵抑制试验(PAβ N)检测外排泵表型。聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction PCR)检测81株临床菌株β-内酰胺酶基因与RND家族3个主要外排系统AdeABC、AdeIJK及 AdeFGH结构基因与调控基因分布情况,比较其在 IRAB及ISAB中分布差异,进一步使用实时荧光定量聚合酶链反应(Realtime-PCR)检测其主要外排基因表达水平。  结果:临床分离81株鲍曼不动杆菌只对米诺环素耐药率稍低,为30.9%;其次为亚胺培南,耐药率为53.1%;对其它抗菌药物耐药率均超过60%;对头孢西丁、复方新诺明耐药率最高,分别为97.5%、93.8%。环境分离28株鲍曼不动杆菌相比临床分离菌株对13种抗菌药物更为敏感,对亚胺培南和美罗培南的耐药率仅为7.1%、3.6%;对米诺环素耐药率为10.7%;除头孢西丁外,对其它抗菌药物耐药率在20%~50%。ERIC-PCR结果显示81株临床分离菌株可分为6型,A型65株,为主要克隆株,B型7株,C型6株,D、E、F型各1株。28株环境分离菌也分为6型,A型13株。81株鲍曼不动杆菌 PFGE基因分型分为7型,包括 A型59株,B型7株,C型4株,D型5株,E型3株,F型2株、G型1株。环境分离菌分为9型,A型15株,B型2株,C型1株,D型2株,E型3株,F型2株,G、H、I型各1株。在β-内酰胺酶检测中,所有菌株中均携带OXA-51基因,未检测到OXA-24、OXA-58、VIM-1以及VIM-2基因。β-内酰胺酶基因AmpC、OXA-23与IMP-1的检测率分别为83.9%、71.6%及54.3%。加入外排泵抑制剂 PAβN,81株鲍曼不动杆菌分离株中,43株(53%)对亚胺培南的MICs有了4~32倍的降低,可认为外排泵表型阳性。在AdeABC外排系统中,adeB、adeS和adeR的检出率分别为78%、78%和74%。在AdeIJK及AdeFGH外排系统中,adeJ、adeL、adeF、adeG和adeH的检出率均大于90%。经统计学分析,β-内酰胺酶基因AmpC、OXA-23及外排基因adeB与adeG在IRAB组和ISAB组中的分布差异具有统计学意义。在定量PCR中,IRAB的adeB、adeJ和adeG基因的表达量平均为ISAB的3.182、2.787和7.298倍,经统计分析,adeB和adeG表达量在IRAB和ISAB中差异具有统计学意义。  结论:我院鲍曼不动杆菌只对米诺环素耐药率稍低,其次为亚胺培南。临床可根据药敏结果选择合适抗菌药物。A型克隆株为我院鲍曼不动杆菌主要流行株,临床菌株与环境菌株具有较高同源性,科室间存在交叉感染的可能性,需采取切实有效的措施及时进行干预。产生β-内酰胺酶 Amp-C、OXA-23与主动外排系统 AdeABC、AdeFGH过表达在鲍曼不动杆菌碳青霉烯耐药中发挥重要作用。
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