益肺逐积方诱导肺癌A549细胞凋亡的作用机制研究

来源 :河南中医药大学 河南中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiji1st
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目的:  通过研究中药复方益肺逐积方对人肺腺癌A549细胞生长活性、细胞凋亡和凋亡相关蛋白GPR30、EGFR表达的影响,为益肺逐积方的临床应用提供实验室理论支持。  方法:  MTT法检测不同浓度(1.5、2、2.5g·L-1)益肺逐积方含药培养液作用于人肺腺癌细胞A549不同时间(24h、48h、72h)后对其活性的影响;利用AO/EB染色法观察不同浓度(1.5、2、2.5g·L-1)益肺逐积方含药培养液作用人肺腺癌 A549细胞不同时间(24h、48h)后的凋亡形态变化;流式细胞术检测不同浓度(1.5、2、2.5g·L-1)益肺逐积方作用A549细胞48h后的细胞凋亡率;利用Western blot技术检测不同浓度(1.5、2g·L-1)益肺逐积方作用A549细胞不同时间(24h、48h)后对凋亡相关蛋白GPR30、EGFR表达的影响。  结果:  1 MTT结果显示,不同浓度(1.5、2、2.5g·L-1)益肺逐积方作用于A549细胞24h、48h、72h后,与作用相同时间的阴性对照组相比,平均OD值均明显低于阴性对照组(P<0.05);  2荧光显微镜结果显示,AO/EB双荧光染色后,阴性对照组发出弱而均匀的荧光,且颜色均一,高、中、低浓度(2.5、2、1.5g·L-1)益肺逐积方作用24h、48h后,A549细胞的数量减少,亮度增强,镜下可见凋亡小体和破裂细胞,甚至出现大量橘红色、固缩状的凋亡细胞。所以,形态观测发现应用益肺逐积方作用A549细胞后细胞出现大量凋亡。实验药物组之间相比,对A549细胞凋亡形态的影响程度由强到弱依次是:高浓度组、中浓度组、低浓度组。  3流式细胞仪检测结果显示,高、中、低浓度(2.5、2、1.5g·L-1)益肺逐积方作用48h后,各药物组作用的细胞均被诱导产生大量凋亡现象,各药物组A549细胞晚期凋亡率均显著高于阴性对照组(P<0.05),提示益肺逐积方可以诱导A549细胞发生晚期凋亡。  4 Western Blot实验结果显示,与阴性对照组比较,中、低浓度(2、1.5g·L-1)益肺逐积方作用24h后,A549细胞中蛋白EGFR、GPR30的表达水平均出现不同程度的下降,中浓度组比低浓度组下降明显;与阴性对照组比较,中、低浓度(2、1.5g·L-1)益肺逐积方作用48h后,A549细胞中蛋白EGFR、GPR30的表达水平均出现不同程度的下降,中浓度组比低浓度组下降明显。  结论:  1益肺逐积方能抑制人肺腺癌细胞活性;  2益肺逐积方可以诱导人肺腺癌细胞发生晚期凋亡,出现典型凋亡形态学改变;益肺逐积方对人肺腺癌细胞活性的抑制作用可能与诱导其发生晚期凋亡相关。  3益肺逐积方抑制人肺腺癌细胞活性,诱导其发生晚期凋亡的机制可能与下调GPR30、EGFR蛋白表达水平,阻断两者介导的信号转导通路有关。
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