苏丹红I与柠檬黄单链融合抗体的制备及快速免疫学检测方法研究

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苏丹红Ⅰ(SudanⅠ)常用于工业染料,现被一些食品企业作为食品添加剂使用。由于苏丹红Ⅰ食用后在相应酶的作用下,在体内产生致癌物质,对人体具有十分严重的危害,因此,我国及欧盟严禁在食品中添加苏丹红Ⅰ。柠檬黄色素(Tartrazine)是目前我国批准使用的六种食用合成色素之一。人工合成色素是指用人工化学合成方法所制备的有机色素,主要以煤焦油中分离出来的苯胺染料为原料制成,所以食用合成色素具有一定毒性,我国对在食品中添加合成色素有严格限制。凡是肉类及其加工品,鱼类及其加工品等都不能使用人工合成色素,即使在适用的品种和范围内,使用剂量也有严格规定,决不允许过量使用。在不法利益的驱动下,我国一些食品企业在食品中添加苏丹红Ⅰ和超量添加柠檬黄的现象较为普遍,自2005年以来,已经发生了多起在食品中添加苏丹红Ⅰ、柠檬黄事件,其危害和影响都非常严重,日益引起人们的关注。苏丹红等的危害主要是致癌性,危害效应时间较长,短时间内看不到。目前,对苏丹红Ⅰ常用的检测方法是高效液相色谱法,柠檬黄常用的检测的方法是薄层分析及分光光度计法,但这些方法费时费力,检测主要依靠仪器,很难普及。ELISA方法简便易行,可以弥补其不足,同时,以其单克隆抗体为检测试剂,为苏丹红Ⅰ和柠檬黄的检测提供了便利条件。国内外关于苏丹红Ⅰ、柠檬黄单克隆抗体的相关报道较少。我们依据苏丹红Ⅰ的结构特点,合成苏丹红Ⅰ结构类似物,与载体蛋白偶联,利用杂交瘤技术获得了苏丹红Ⅰ单克隆抗体,依据柠檬黄分子结构特点,利用杂交瘤技术获得了柠檬黄单克隆抗体。利用免疫技术分别组装了两种色素的ELISA快速检测试剂盒。利用胶体金技术,制备了苏丹红Ⅰ的快速检测试纸条。利用生物技术分别获得了两种单克隆抗体的单链抗体,利用基因Linker技术,将两种单链抗体基因连接制备融合基因并表达,表达产物能够同时识别苏丹红Ⅰ、柠檬黄色素,为下一步苏丹红Ⅰ、柠檬黄快速广谱检测研究打下了基础。
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