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鸭细小病毒病是由鸭细小病毒(duck parvovirus DPV)引起,以雏鸭为易感的急性传染性疾病。该病发病率和死亡率可达50%～80%以上,是制约鸭养殖业发展的重要疫病之一。本研究就2004年2～4月间浙江省宁波市余姚地区多个鸭养殖场暴发的以呼吸急促、腹泻等为主要症状的雏鸭急性传染性疫病病原为研究对象,通过临床病理、病原形态、免疫血清学、SDS-PAGE电泳和PCR等实验和鉴别诊断,确定引起该鸭场疫病的病原为DPV,并就其ns基因进行克隆测序与分析。 禽流感是由正粘病毒科中的A型流感病毒引起的一种禽类感染和疾病综合症。H9N2亚型禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)一般呈低至中等毒力,但由于其分布广泛、能造成宿主的免疫抑制以及可以与其它致病微生物协同作用,因此它对养禽业的危害不可忽视。本研究就2003年在湖北地区分离的鸡源H9N2亚型禽流感病毒Ck/HB/03毒株为研究对象,采用分子生物学方法,进行全基因组序列测定与分析。 针对鸭细小病毒和禽流感病毒的研究结果如下: 1.完成了病原的分离、增殖,并采用蔗糖梯度离心法纯化病毒,电镜观察可见直径约20nm的球形病毒粒。 2.利用病鸭肝组织匀浆液进行雏鸭感染试验,发病率100%,死亡率为75%。并观察雏鸭发病症状以及病理解剖变化,其临床症状与病理解剖表现为典型的鸭细小病毒病病征。 3.通过免疫琼脂扩散实验,检测分离样品中是否存在鸭细小病毒。实验结果表明:所分离到的样品与鸭细小病毒(duck parvovirus DPV)抗血清有明显沉淀线;并通过鸡红血球凝集实验与鸭肝炎Ⅰ型、禽流感和新城疫病毒感染鉴别。 4.利用SDS-PAGE电泳分析病毒结构蛋白,结果可见3条结构蛋白带,与所报道的DPV毒株一致; 5.利用PER方法对病原进行鉴定。参照GenBank DPV-ns基因序列979bp-1566bp设计引物,PCR扩增反应获得其目的片段。 6.对ns基因的扩增产物克隆测序。将所得目的片段克隆到载体pMD18-T后测序,该序列与GenBank中的番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)以及巴比里鸭细小病毒(Barbarie duck parvovirus,BDPV)的ns基因序列同源性为98%。