肝细胞肝癌乙肝病毒基因整合位点及临床病理分析

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目的探讨乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)在肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)染色体上的整合规律及其与临床病理参数的关系。方法收集安徽医科大学第一附属医院肝胆外科2011年1月~2012年2月共40例HBsAg阳性HCC患者围手术期的一般临床资料和病理学资料,并进行术后随访。以40例HCC组织的DNA为模板,HBV X基因上游序列和人类基因组Alu重复序列为引物,应用巢式PCR原理,扩增出HBV X基因及其侧翼的人基因组DNA片段。PCR产物进行全自动测序。所获结果经美国国家生物技术信息中心(NCBI) BLAST及Mapviwer检索确认HBV整合在染色体上的精确位置。结合临床病理参数及随访资料分析HBV DNA整合对HCC患者的影响。应用Kaplan-Meier分析HBV DNA整合组以及未整合组患者术后的无瘤生存率及总体生存率。Cox回归单因素及多因素分析影响HCC患者术后生存的因素。结果40份HCC组织中,18例存在HBV整合现象,另22份标本未检测到有整合。整合的标本中15例正向插入宿主基因,7例反向插入宿主基因,其中4例既有正向插入,又有反向插入,2例有两个HBV整合位点。其中4个基因(homosapiens telomerase reverse transcriptase、mixed-lineage leukemia4、cyclin E1和SUMO specific protease5)发现被HBV重复整合,从病毒基因分析,整合可发生于X基因的任意长度,且均以截短方式插入宿主细胞DNA。HBV整合与HCC患者在性别、年龄、AFP、镜下癌栓、脉管侵犯、包膜、子灶及复发等方面无关(P>0.05);而与HBeAg阳性、HBV DNA水平、肿瘤大小、分化程度呈正相关(P<0.05)。全组病例随访时间3月~35月,平均17.2±7.6月,整合组平均总体生存时间为低于未整合组(14.0±5.8月vs19.8±8.1月),整合组1、3年总体生存率低于未整合组(77.7%vs86.4%、72.2%vs81.8%),1、3年无瘤生存率亦低于未整合组(66.7%vs86.4%、55.6%vs63.6%),均无统计学意义(P>0.05)。结论HBV在HCC细胞染色体上存在整合且为不均衡分布。HBV整合与HCC患者HBeAg阳性、HBV DNA水平、肿瘤大小以及分化程度呈正相关,且影响HCC患者术后总体生存时间、无瘤生存率和总体生存率。HCC术后复发为影响HCC患者术后生存的独立危险因素。
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