黄芪注射液对TGF-β1诱导的肾足细胞骨架蛋白Vimentin及α-actinin-4的干预作用

来源 :浙江中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuxc1112
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目的:探讨黄芪注射液对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导肾足细胞骨架蛋白波形蛋白(Vimentin)及α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)变异的干预作用,为其临床应用提供有力的实验依据。  方法:体外培养小鼠肾小球足细胞,然后将体外培养的小鼠肾足细胞分为4组,即正常对照组、模型组、黄芪组和甲基强的松龙组。正常对照组仅用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液培养;模型组在上述培养液中加入 TGF-β1至2ng/mL;黄芪组在模型组基础上加黄芪注射液至50mg/mL干预;甲基强的松龙组在模型组基础上加注射用甲基强的松龙至500ng/mL干预。用蛋白质免疫印迹法(Western-blotting)和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)分别测定各组足细胞骨架蛋白Vimentin、α-actinin-4的蛋白水平和基因表达水平。  结果:1.37℃分化的足细胞特异性骨架蛋白α-actinin-4蛋白表达水平较未分化细胞明显升高;未分化细胞中未检测出 Vimentin蛋白表达,而在37℃分化的足细胞中Vimentin表达显著增强。2. TGF-β1刺激后,模型组足细胞Vimentin蛋白表达和基因表达分别较正常对照组降低了41%和45%。黄芪干预使 Vimentin蛋白表达较模型组上调85%,基因表达上调17%。甲基强的松龙组Vimentin蛋白表达和基因表达亦较模型组明显增高,分别达61%和103%。3. TGF-β1刺激的模型组足细胞α-actinin-4蛋白表达和基因表达水平较正常对照组显著下降,黄芪注射液干预对α-actinin-4蛋白表达无显著影响,甲基强的松龙干预组α-actinin-4蛋白表达较模型组上调80%,显著高于黄芪组。但各干预组α-actinin-4基因表达与模型组无统计学差异。  结论:研究结果表明,足细胞骨架蛋白Vimentin、α-actinin-4可能与足细胞成熟分化或分化成熟足细胞的形态或功能有关。TGF-β1刺激可使分化成熟的足细胞具有去分化表型。黄芪干预对TGF-β1诱导的足细胞骨架蛋白表达异常有一定的阻抑作用,可在一定程度上维持细胞骨架的稳定。黄芪及甲基强的松龙对足细胞不同分子作用强度不同,提示联合用药有可能同时在多个靶点上起到保护足细胞、阻抑足细胞异常的作用。
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