胰腺癌是消化道肿瘤中恶性程度较高的一种，由于其易发生早期局部浸润（侵犯周围淋巴结、血管、神经等）和远处转移，且由于其发生部位特殊，往往确诊已晚期，胰腺癌已经成为威胁人类健康的杀手。在发达国家，胰腺癌是主要的导致死亡的肿瘤之一。据调查发现仅有约10%的胰腺癌患者在确诊时有手术切除的机会，而这些经手术治疗的患者1年生存率和5年生存率小于5%和1%。近年来一些肿瘤学家开始关注一种新的治疗癌症的方法：过继免疫疗法。其中CD4~-CD8~-双阴T细胞是新近发现的一中特殊类型的T淋巴细胞，其在外周血中占总淋巴细胞的1%~-5%。人们通过实验证实DNT细胞可以通过各种途径杀伤于抗原特定细胞或肿瘤细胞，使得免疫治疗成为研究热点。DNT细胞在免疫调节、免疫抑制、自身免疫性以及抗宿主反应、HIV感染以及抗肿瘤方面有重要作用。本研究主要通过免疫组化技术检测胰腺癌患者癌组织中DNT细胞含量的变化情况，并在体外分离扩增出做够数量的DNT细胞，研究其对人胰腺癌细胞系Panc-1的影响。目的：本研究采用免疫组化技术检测胰腺癌患者与对照组胰腺组织中CD3~+CD4~-CD8~-CD56~-CD57~-双阴T细胞(DNT)表达情况。探讨CD3~+CD4~-CD8~-CD56~-CD57~-双阴T细胞的体外扩增技术，分析其对人胰腺癌细胞系Panc-1的影响。方法：（1）免疫组化技术检测胰腺癌患者与对照组胰腺组织中CD3~+CD4~-CD8~-CD56~-CD57~-双阴T细胞(DNT)的表达情况；（2） DNT细胞培养：应用抗体吸附法扩增外周血双阴T细胞，流式细胞仪检测所得细胞表型；（3） DNT细胞对人胰腺癌细胞Panc-1细胞的增值的影响：MTT法检测DNT细胞对胰腺癌细胞Panc-1的增殖的影响，（4）裸鼠荷瘤实验：通过对裸鼠皮下种植人胰腺癌细胞Panc-1产生移植瘤，观察DNT细胞对裸鼠荷瘤的生长曲线和抑瘤率的影响。结果（1）胰腺癌癌旁组织中DNT细胞高表达，而健康对照组胰腺组织中DNT细胞不表达。高、中分化型胰腺癌组织中DNT细胞的含量明显高于低分化型患者。（2）每10ml外周血经抗体吸附法，培养12天左右，所得细胞数量为2.0×106个以上，随着培养时间的延长，细胞纯度逐渐提高,流式细胞仪检测所得细胞表型为CD3~+CD4~-CD8~-CD56~-CD57~-。（3）MTT检测当DNT细胞数与胰腺癌细胞Panc-1数量之比为1：1时，胰腺癌细胞的增殖明显减弱（P=0.000，P<0.05）；当DNT细胞数达到胰腺癌细胞数10倍时，抑制作用达到峰值（P=0.659,P>0.05）。（4）DNT细胞能明显抑制Panc-1细胞裸鼠皮下移植瘤的生长（P=0.000,P<0.05）。结论胰腺癌癌旁组织中DNT细胞的含量显著高于健康对照组，且DNT细胞的含量与肿瘤分化程度有关。DNT细胞可以体外扩增到满意的数目，DNT细胞抑制胰腺癌细胞株Panc-1增殖。