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背景胃癌是目前世界上死亡率位列第二的恶性肿瘤，在我国仍居消化道恶性肿瘤的首位。最大限度的抑制肿瘤的侵袭转移一直以来都是肿瘤学研究的热点问题。Cystatin M，由CST6基因编码，是一种分泌型半胱氨酸蛋白酶抑制剂。半胱氨酸蛋白酶可以降解细胞外基质，参与癌细胞的侵袭转移，所以半胱氨酸蛋白酶与肿瘤细胞的浸润转移密切相关。Cystatin M可以抑制半胱氨酸蛋白酶的活性，因此cystatin M很早就受到关注。最先发现的是转移乳腺癌细胞中cystatin M低表达。体外过表达cystatin M可以抑制乳腺癌细胞的侵袭转移能力。William B.Coleman等发现，56%的原发乳腺癌和85%淋巴结转移乳腺癌细胞中存在cystatinM低表达。后来发现卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌等均有cystatin M低表达现象。本课题组前期研究发现70%胃癌组织中cystatin M表达缺失，并主要围绕cystatinM基因的DNA编码序列开展了一系列研究，利用生物信息学在线程序对cystatinM基因转录起始点上游序列的预测显示，该基因转录调控区存在高含量CpG岛，推测启动子区高甲基化可能是基因沉默的原因之一，后续实验也证明我们的推测的正确性，胃癌细胞用甲基化酶抑制剂处理后，cystatin M重新表达，说明cystatin M启动子高甲基化与其低表达密切相关。然而，cystatin M在胃癌的发生发展的作用尚不清楚，对胃癌细胞生物学行为的影响、胃癌治疗中的作用等方面尚未有研究报道。在接下的试验中，我们将体外构建过表达cystatin M的载体，体外转染胃癌细胞株SGC-7901观察对其增殖和迁移能力的影响。目的通过人工合成CST6基因，构建含目的基因的载体，体外电穿孔法转染胃癌细胞株SGC-7901，观察CST6基因表达对胃癌细胞体外增殖和迁移能力的影响，为进一步探讨其抗胃癌机制提供理论依据。方法根据CST6基因mRNA序列（GenBank: NM001323.3）及载体pcDNA3.1（+）结构确定合成序列，上游加入HindIII酶切位点及Kozak序列（GCCACC），下游加入BamHI酶切位点，与pcDNA3.1（+）真核表达质粒构建重组载体。经PCR、双酶切和测序鉴定，电穿孔法转染至处于对数生长期的胃癌SGC-7901细胞株，G418筛选出阳性克隆，低浓度维持培养，构建稳转细胞系，分别命名为SGC-7901/CST6细胞、SGC-7901/pcDNA3.1（+）细胞。实验分3组：pcDNA3.1（+）-CST6组、pcDNA3.1（+）组和未转染组。RT-PCR和Western Blot分别检测3组细胞CST6mRNA和cystatin M蛋白的表达。MTT实验和划痕实验检测3组细胞增殖和迁移能力。实验数据采用SPSS17.0软件进行统计学分析，经正态性检验和方差齐性检验，单因素方差分析用于多组均数比较，LSD-t法用于组间比较，P＜0.05为差异有统计学意义。结果1成功构建pcDNA3.1（+）-CST6真核表达载体。2成功筛选出过表达CST6稳转细胞株，能够稳定表达cystatin M。3MTT实验中绘制各组细胞生长曲线发现，pcDNA3.1（+）-CST6组细胞增殖较未转然组细胞明显受到抑制，差异具有统计学意义（P＜0.05），而pcDNA3.1（+）组与未转染组差异无意义。4细胞划痕实验发现，pcDNA3.1（+）-CST6组细胞迁移入划痕区的相对距离较未转染组和pcDNA3.1（+）组细胞明显减少，差异具有统计学意义（P＜0.05），而pcDNA3.1（+）组和未转染组细胞之间差异无意义。结论CystatinM表达能够抑制胃癌细胞的增殖和迁移能力，揭示其可以作为抑制胃癌转移的候选基因，并有希望成为胃癌基因治疗的新靶点。