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第一部分SIPA1在宫颈癌中的表达及临床意义目的探讨信号诱导增殖相关蛋白1(signal induced proliferation associated protein1, SIPA1)在宫颈癌中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法免疫组织化学Envision法检测正常宫颈(n=40)和宫颈癌组织(n=244)石蜡标本中SIPA1蛋白的表达,分析SIPA1与临床病理资料之间的关系。结果1. SIPA1蛋白在正常宫颈和宫颈癌组织中阳性率分别为87.5%和58.2%,差异显著(P<0.01)。2. SIPA1蛋白在有和无盆腔淋巴结转移的宫颈癌中阳性率分别为17.0%和68.0%,差异显著(P<0.001),且SIPA1阴性者发生淋巴结转移风险高于阳性患者(P<0.01),OR值为10.4(95%CI=4.578～23.484)。宫颈癌组织中SIPA1表达与淋巴结转移呈负相关(r=-0.331,P<0.001)。SIPA1表达与发病年龄、病理类型、FIGO分期以及细胞分化水平无关。结论在宫颈癌中SIPA1基因表达下调,与宫颈癌淋巴结转移有关,有望成为预测淋巴结转移风险的指标。第二部分SIPA1与HPV16/18E6及其下游Ras-Raf-ERK信号通路的关系目的明确宫颈癌中SIPA1和HPV16/18E6蛋白表达的关系及SIPA1对宫颈癌细胞Ras-Raf-ERK信号通路的调控,并阐明SIPA1对宫颈癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法1. Western blot检测宫颈癌C33a、SiHa、HeLa和CaSki细胞株中HPV16/18E6和SIPA1蛋白表达。2.免疫组织化学Envision法检测宫颈癌组织(n=174)石蜡标本中HPV16/18E6蛋白的表达。3.构建pEGFP-N1-SIPA1-EGFP质粒稳定转染宫颈癌HeLa和SiHa细胞株。G418筛选获得稳定表达SIPA1的HeLaSIPA1+和SiHaSIPA1+细胞克隆。4. Western blot检测细胞中SIPA1、ERK1/2、pERK1/2和β1整合素表达。5.免疫组织化学法检测宫颈癌组织中SIPA1、ERK1/2、pERK1/2和β1整合素表达。6.免疫荧光细胞化学法检测细胞中F-actin分布和结构。7.MTT法检测SIPA1对细胞增殖能力的影响。8.划痕愈合实验和Transwell细胞迁移实验测定HeLaSIPA1+和SiHaSIPA1+细胞迁移能力的变化。结果1.在HPV16/18E6阴性的C33a细胞中SIPA1阳性表达,在HPV16/18E6阳性的SiHa、 HeLa和CaSki细胞株中SIPA1不表达。2.宫颈癌组织免疫组化结果表明HPV16/18E6在宫颈癌中的阳性率为79.3%(138/174),在有和无盆腔淋巴结转移病例中阳性率分别为97.6%(41/42)和73.4%(97/132),差异有统计学意义(P=0.001)；HPV16/18E6阳性者淋巴结转移的风险高于阴性者,OR值为14.79(95%CI=1.96～111.63)；SIPA1与HPV16/18E6蛋白表达呈负相关(r=-0.249,P<0.001)。3. Western blot法检测发现HeLa和SiHa两种细胞系中过表达SIPA1后总ERK1/2表达水平,但其磷酸化水平下降；同时也发现β1整合素水平上调。4.与空载体转染相比,HeLaS1PA1+和SiHaSIPA1+细胞中F-actin较细,多呈细丝状围绕膜周分布,细胞形态变圆,伪足减少。5. SIPA1表达不影响HeLa和SiHa细胞的增殖能力。6.在HeLaS1PA1+和SiHaSIPA1+两组细胞中穿膜细胞数分别比HeLavector和SiHavector细胞明显减少,差异有统计学意义(P<0.001)。划痕愈合实验检测也显示HeLa SIPA1+和SiHaSIPA1+细胞迁移能力较HeLavector和SiHavector细胞明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌中SIPA1表达与HPV16/18E6表达负相关,且SIPA1参与对E6下游信号通路的调节。过表达SIPA1能够抑制宫颈癌细胞迁移能力。提示SIPA1可能通过调控Ras-Raf-ERK信号通路参与宫颈癌的浸润转移。