论文部分内容阅读
研究目的:(1)对已发表的中药内服法治疗慢传输型便秘的临床观察文献进行数据挖掘,分析方剂的用药频率、性味归经、类别和用药,总结出支持度最高的药物核心组合,为临床中医药组方治疗慢传输型便秘提供参考。(2)以“六腑以降为顺”的中医理论为指导,对加味济川煎治疗慢传输型便秘(脾肾阳虚型)的临床疗效进行分析,及通过观察患者血清5-HT、VIP表达水平来证实加味济川煎的疗效性。(3)运用网络药理学和分子对接方法,通过探讨济川煎治疗慢传输型便秘的潜在活性成分、核心靶标及主要信号通路,阐明其作用机制,为进一步的动物实验验证提供参考价值。研究方法:(1)在中国知网、万方、维普三大中文数据库对建库至今的文献进行检索,收集用中药内服法治疗慢传输型便秘的临床观察类文献。运用Note Express软件根据纳入、排除标准筛选文献。对数据进行规范化处理后用Excel建立数据库,用SPSS Statistics26、SPSS Modeler18软件对中药进行频数统计、聚类、关联规则和因子分析,对高频药物及组方进行分析。(2)通过随机数字法将自2019年9月至2020年9月期间,在江西中医药大学附属医院肛肠科住院部及门诊就诊并确诊的60例脾肾阳虚型慢传输型便秘老年患者,分为治疗组和对照组。治疗组服用加味济川煎,对照组服用乳果糖口服溶液。4周治疗结束后,对两组患者血清5-HT和VIP、临床疗效、Cleveland评分、大便性状及中医症状积分进行比较,结果用SPSS Statistics26进行卡方检验和T检验进行分析。并于停药3个月后对两组患者进行随访。(3)通过中药系统药理分析平台(TCMSP),筛选出济川煎中主要活性成分。通过Gene Cards、OMIM、Drug Bank数据库筛选慢传输型便秘的作用靶点。通过R语言将济川煎药物作用靶点与STC疾病靶点取交集并绘制Venn图,通过STRING平台将药物疾病共同靶点构建PPI蛋白互作网络图。采用Cytoscape软件制作药物活性成分-疾病关键靶点网络图。用R语言、Bioconductor平台对靶基因进行GO富集分析和KEGG富集通路分析。选取核心靶点TP53,对济川煎核心活性成分槲皮素、山奈酚、汉黄芩素、β-谷甾醇、黄芩黄素进行分子对接,通过Pubchem、PDB数据库获取受体、配体结构,用Autodock软件进行分子对接并进行打分。结果:(1)(1)收集到的211篇文献,比对纳入、排除标准后纳入72篇,明确处方61首。共载药87味,累计药物频数为670次,药物使用频数≥10的有白术、当归、黄芪、地黄、枳实、肉苁蓉、枳壳、厚朴、麻黄、麦冬、杏仁、玄参等24味中药。四气以温、寒为主,五味以甘、苦为主,大多归脾、胃、肺、大肠经。药物类别多为补虚药、理气药和清热药;(2)聚类分析可分为麦冬-玄参-地黄-杏仁、瓜蒌-郁李仁-火麻仁-白术、当归-黄芪、厚朴-槟榔-枳实-何首乌-桃仁-甘草、党参-陈皮-炙甘草、肉苁蓉-牛膝-升麻-枳壳-柴胡六大类;因子分析得到7类:地黄-麦冬-玄参、何首乌-甘草、枳实-枳壳、肉苁蓉-升麻、火麻仁-瓜蒌-郁李仁、厚朴-杏仁-党参、黄芪-桃仁;(3)通过关联规则筛选出支持度最高的核心药物组合为当归-肉苁蓉、黄芪。(2)(1)治疗4周后,加味济川煎治疗组的有效率为96.67%,乳果糖对照组有效率为76.67%,且两组相比P<0.05,治疗组疗效较对照组高;(2)比较血清5-HT、VIP水平,两组5-HT水平均升高,但治疗组指标升高明显(P<0.01),两组VIP水平均降低,治疗组降低明显(P<0.01);(3)在Cleveland评分、大便性状评分、中医症状积分方面,治疗组较对照组明显降低(P<0.01),治疗组疗效更佳;(4)两组在研究过程中均未发生不良发应。3个月后进行随访,治疗组复发率为13.3%,对照组复发率为46.7%,治疗组长期疗效更佳。(3)(1)在TCMSP数据库中得到济川煎有效活性成分28个,作用靶点共2557个;(2)在Gene Cards、OMIM、Drug Bank数据库中筛选出STC相关靶点1540个,通过Venn图获得121个共同基因,将其导入String数据库绘制PPI蛋白互作网络图,得到蛋白103个;(3)通过Cytoscape构建药物—疾病靶点网络图,并通过拓扑分析得到度值前5的靶点:TP53、AKT1、MAPK1、JUN、RELA;(4)GO富集分析显示生物过程主要包括氧化应激反应、营养水平反应及细胞化学应激反应;细胞组成主要包括质膜外侧面、质膜内部和质膜区;分子功能主要包括DNA结合转录因子结合、RNA聚合酶Ⅱ特异性DNA结合转录因子结合和泛素样蛋白连接酶结合;KEGG通路富集分析共160条信号通路,主要参与调控胃肠道的有PI3K-Akt、TNF、MAPK、及炎症性肠病信号通路;(5)分子对接结果表明β-谷甾醇与TP53结合最紧密。结论:(1)现代医者在用中药内服法治疗慢传输型便秘的辨证论治过程中,主要从脾、胃、肺、大肠论治,重视多脏腑诊治。治疗上以脏腑同治、宣畅气机、调节情志为原则选方用药;聚类分析和关联规则筛选出的药物组合总结了现代医者对STC的治疗思路,对临床组方用药具有参考价值。(2)加味济川煎具有改善脾肾阳虚型慢传输型便秘症状、缩短病程、疗效持久且安全性高的优点,临床上值得应用。但目前本研究还缺乏实验室相关指标来进一步验证加味济川煎治疗STC作用机理,需要进行更精准的临床或基础研究,为今后指导临床用药提供思路。(3)通过构建济川煎药物靶点和STC疾病靶点可视化网络图,以网络药理学的角度分析济川煎治疗STC机制,并发现济川煎可通过PI3K-Akt、TNF、MAPK、及炎症性肠病等信号通路来调控胃肠道、改善STC症状,表明济川煎具有抗炎抗菌抗病毒、抗氧化、调节免疫和胃肠道等药理学作用,为进一步的动物实验研究提供前期基础。