血管损伤是动脉粥样硬化等血管疾病治疗后出现的严重问题,研究血管损伤的修复策略对于该类型血管疾病的治疗的作用不言而喻。血管生成因子AGGF1作为一种强有力的血管生成因子,在治疗血管损伤上有着重大意义。AGGF1是在对KTS疾病研究中发现的一个致病基因,研究表明其与血管内皮生长因子效果类似。VSMC细胞和EC细胞中都有较高水平的AGGF1表达,并表现出强有力的促血管生成的作用。在对AGGF1敲除小鼠进行研究中,发现其对血管生成和血管发育至关重要,证明是血管完整性的重要调节因子。通过对斑马鱼实验研究,证明了AGGF1可以通过激活AKT通路调节血管的生成。在前期的研究中,发现AGGF1有着刺激EC细胞分裂、粘附和迁移的作用,并找到了该作用的功能域。在最近的实验中发现在新内膜形成过程中,颈动脉中VSMC细胞在血管损伤后的增殖增加;AGGF1蛋白通过抑制小鼠体内的VSMC的增殖和促进表型转换至收缩表型来阻断血管损伤后的新内膜形成。其收缩表型的特征在于收缩蛋白的高表达,典型的肌动蛋白有α-SMA,SM22和MYH11。因此,为了更好的阐述AGGF1结构与功能的关系,本论文主要研究AGGF1蛋白促血管生成作用的最小功能域,并通过动物体内实验验证其治疗效果。为更进一步寻找具有血管损伤治疗的关键结构域,我们纯化了一系列N端和C端截短的AGGF1蛋白。已知AGGF1在血管损伤后的新内膜形成中起重要作用,能够有效的促进血管内皮细胞EC和血管平滑肌细胞VSMC粘附、分裂与增殖。AKT在调控细胞的生长、增殖、代谢、转录以及蛋白质合成等功能上有重要作用。因此在血管损伤后,可根据磷酸化AKT的水平来判断血管生成效果。通过合适的条件纯化蛋白,并将各截短蛋白刺激血管内皮细胞,用WB检测磷酸化AKT的表达。实验表明,在604位氨基酸到614位氨基酸之间的区域能有效的提高AKT磷酸化的水平,证明AGGF1蛋白促血管生成作用的区域位于604-614位氨基酸区域。为了更进一步验证这个结果,我们进行了体内实验验证。α-SMA、SM22和MYH11均参与细胞运动和细胞结构完整性的维持,可通过三者的水平判断血管生成与治疗的效果。对C57BL/6J小鼠进行了颈动脉结扎手术,通过QPCR的技术检测α-SMA、SM22和MYH11的表达,验证AGGF1以及截短蛋白在动物体内对血管损伤治疗的效果。实验结果表明,小鼠体内实验与细胞检测AKT磷酸化结果一致,AGGF1蛋白促血管生成作用的区域位于604-614位氨基酸区域。本论文研究了AGGF1蛋白促进血管生成作用的最小功能域,并第一次利用动物体内实验验证了该结果,对未来利用AGGF1片段制造血管生成的肽类药物提供了思路。