烟草青枯病是烟草生产上一大毁灭性土传病害,病原为青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum E F Smith)。目前防治烟草青枯病的主要方法是化学防治,但还没有一种特效药剂,且化学防治易产生“3R”问题,给环境造成很大的影响。生物防治对环境无污染,越来越受到植物病理学家的青睐。无致病力青枯菌来自植物,与青枯致病菌有相同的进入寄主植物的机制,是青枯病生防材料的重要来源。
　　本研究的目的在于找到对烟草青枯病有较好拮抗性的菌株,并能对其控病机理有初步的了解。将实验室保存的青枯无致病力菌株经平板复壮后用于烟草青枯病的控病试验,并对相对防效较好菌株进行田间小区控病、在烟草植株上的定殖试验,并对其进行了初步的鉴定,得到了以下结果:
　　1、将实验室保存的青枯无致病力菌株进行平板的复壮,并用平板喷雾法测试了出发菌株与复壮菌株对青枯菌的平板抑菌效果,结果显示所用复壮方法-平板划线法可以使部分菌株对青枯菌的平板抑菌效果有所提高,经平板的初筛、复筛后得到15株平板抑菌效果较好菌株;对从烟草典型青枯病植株上分离的菌株进行致病性测定,选取致病性较强菌株FL-9-1为青枯病指示菌株;
　　2、将平板抑菌效果较好的15个菌株用于烟草青枯病的温室盆栽控病试验的初筛,用伤根接种待测菌后7d接种青枯菌,4周后,有6个菌株对烟草青枯病的相对防效＞70％,菌株Aujd5-2y、Tbw1-7-3、Aujdl1-1-4在一定程度上可以推迟烟草青枯病的发病时间,且在4周后的相对防效为89.4％,与其它菌株处理的相对防效差异显著。将初筛相对防效＞70％的6个菌株用于温室控病试验复筛,4周后,除菌株Aujdl1-1-4外,其余5个菌株伤根接种的相对防效大于灌根接种,菌株Aujd5-2)、Tbw1-7-3的相对防效显著高于其它菌株;
　　3、将菌株Aujd5-2y、Tbw1-7-3用于烟草青枯病田间小区控病试验,以农用链霉素为药剂对照,发病对照发病1个月后,菌株Aujd5-2y对烟草青枯病的相对防效为35.64％,高于农用链霉素处理的相对防效,且差异显著。
　　4、用硫酸链霉素和利福平对菌株Aujd5-2y进行抗药性标记,并将标记菌株Aujd5-2yk接种到烟草植株上,通过组织印迹法和稀释分离法检测该菌株在烟草根表和体内的定殖及消长情况。结果显示,组织印迹法只能在烟草根表检测到该菌,稀释分离法一定时间后在烟草根、茎、叶内都能检测到该菌,说明该菌株可以在烟草体内和根表定殖和转移,伤根接种较灌根接种在烟草体内同期的数量高,且两种方法处理后标记菌株在烟草体内呈现出先增加后减少的趋势。
　　5、对温室控病复筛的6个菌株和定殖试验中回收菌株进行了初步鉴定,主要包括菌体形态、革兰氏染色、生理生化等。结果显示,温室控病6个菌株除菌株Aujdl l-1-4外,其余5个温室控病复筛菌株与青枯菌培养性状、菌体形态、生理生化性状描述一致,且这5个菌株不能引起烟草出现青枯症状,本研究将这5个菌株初步鉴定为Ralstonia solanacearum的无致病力菌株,定殖试验回收菌株与青枯菌性状一致,该菌为所施抗药性标记菌株。