1.目的:抗栓素是莽草酸的合成品,药理研究表明的抗实验性血栓的形成和改善脑缺血造成的损伤等作用,显示出了抗栓素具有良好的应用前景和研究的基础。本课题在以前研究的基础之上,对抗栓素进行了基本性质、制备工艺、质量标准、稳定性、犬体内药代动力学情况的系统研究。通过对抗栓素抗栓素进行基本性质、制备工艺、质量标准、稳定性、犬体内药代动力学情况的系统研究,进一步明确抗栓素的物理化学性质,探讨制备成片剂的辅料选择、压片条件等参数对药物释放的影响;建立抗栓素及其片剂的质量标准;探讨抗栓素及其片剂在动物体内吸收、分布、代谢、排泄的体内过程,从而可以准确、客观、全面的评价抗栓素及其片剂。2、方法:整个课题工作包括抗栓素的基本性质、制备工艺、质量标准、稳定性、犬体内药代动力学情况等内容,采用的方法分别为:(1)抗栓素的基本性质部分: 参照药典的方法研究抗栓素的溶解性能、水分含量、总灰分、炽灼残渣、重金属与砷盐限量;采用加速实验的方法研究抗栓素对光照、湿度、温度的稳定性;采用增重法考察抗栓素临界相对湿度。(2)抗栓素普通片、缓释片制备工艺:以抗栓素释放度测定情况、片剂制备的质量等为考察指标,采用正交实验设计和单因素考察法对影响片剂制备的因素考察、工艺筛选和工艺参数优化。(3)抗栓素普通片、缓释片的质量标准:采用紫外光谱法、薄层色谱方法对片剂中抗栓素进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对片剂中抗栓素的含量进行含量测定。抗栓素缓释片进行释放度的测定。(4)抗栓素普通片、缓释片的稳定性实验:采用留样观察法和温度加速实验法考察抗栓素普通片、缓释片的稳定性。(5)抗栓素普通片、缓释片药代动力学研究:采用高效液相色谱法建立抗栓素体内分析的方法;通过测定犬血药浓度和尿药浓度,进一步计算和分析抗栓素在犬体内的情况。分析的方法采用DAS统计软件。进行室模型分析和矩量分析。建立体内外相关性。3、结果:(1)抗栓素的基本性质研究:抗栓素的溶解性能、水分含量、总灰分、炽灼残渣、重金属与砷盐限量等,确定了其质量限度;抗栓素细粉的粉体性质和对光照、湿度、温度的稳定性考察;抗栓素临界相对湿度的测定。结果抗栓素在40℃、60℃、80℃温度下的含量没有明显变化;90℃时在第8天,抗栓素含量基本损失;临界相对湿度为58%。(2)抗栓素普通片、缓释片制备工艺:以片剂中抗栓素释放的情况、片剂制备<WP=10>VII的质量等为考察指标对影响片剂制备的制粒方法、颗粒性质、辅料用量等进行了工艺筛选,确立了采用颗粒压片的制粒方法、辅料比例、压片条件等最佳制备的工艺参数。采用确定的工艺参数进行了三批中试规模的样品生产。结果工艺参数稳定,制备的片剂符合要求。(3)抗栓素普通片、缓释片的质量标准:采用紫外光谱法、薄层色谱方法对片剂中抗栓素进行了定性鉴别;采用高效液相色谱法对片剂中抗栓素的含量进行了测定,确定了含量的限度,研究包括测定条件的确定、标准曲线的建立、精密度、重现性、稳定性、回收率等实验;对缓释片释放度情况进行了研究。结果空白无干扰,定性和定量的方法稳定、特异性强、重现性好,可以很好的控制药物的质量;抗栓素缓释片2小时释放20～40%、8小时释放40～60%、16小时不低于70%。(4)抗栓素普通片、缓释片的稳定性实验:采用确定的质量标准对抗栓素普通片、缓释片进行了12个月的留样观察稳定性考察(考察时间为0、1、2、3、6、12月,内容包括外观、定性鉴别、定量测定、卫生学检查等,缓释片还包括释放度的测定)和不同温度下的加速实验。结果药物在12个月的留样观察中稳定;抗栓素普通片在40℃、60℃ 及80℃7天的含量没有明显变化,80℃7天以后及90℃时在第7天,抗栓素含量产生较大损失;抗栓素缓释在40℃、60℃, 及80℃16、90℃8天的含量没有明显变化,80℃22天以后及90℃时在第12天,抗栓素含量有较大损失。 (5)抗栓素普通片、缓释片药代动力学研究:在建立了犬体内血药浓度和尿药浓度检测方法的基础上,进行了抗栓素原料静脉和口服、抗栓素普通片、抗栓素缓释片在犬体内血药浓度和尿药浓度的测定。对测定的结果采用了室模型分析和矩量分析,得到了相关的药动学参数,明确了抗栓素在犬体内的药代动力学情况;对抗栓素普通片进行了两次给药的体内药物检测和分析;建立了抗栓素缓释片的体内外相关性。结果:①建立的狗血浆中抗栓素含量的高效液相色谱测定法具有灵敏度高、重现性好、特异性强以及回收率高等优点。适用于抗栓素的药代动力学研究。②实验中曾采用醋酸乙脂、乙醚等作为提取溶剂,但药物提取率低,摸索采用高效液相的流动相(甲醇-0.3%醋酸=50:65)为提取溶剂提取方法好,对抗栓素的回收率高,且提取物中杂质干扰少。对提取次数的考察表明,需要用甲醇-0.3%醋酸=1:1 提取两次。③抗栓素原料静脉注射的血药浓度测定结果:抗栓素原料静脉注射体内过程符合二室模型。抗栓素在二室模型分布相的半衰期平均为 1.03 分钟、消除相的半衰期为 64.48 分钟;在检测时间下血药浓度-时间下的面积为 91039.65(ug/L*min);抗栓素从中央