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目的:建立简单、灵敏、快速、高选择性、重现性好的LC-MS/MS法测定人血浆中非布司他浓度,研究非布司他在健康受试者体内的药代动力学特征。方法:本实验为随机、平行、开放、单周期试验,筛选50名受试者入组,分为5个剂量组,每组10人,男女各半,3个剂量组(A、B、C组)分别空腹口服单剂量非布司他片40mg、80mg和120mg,2个剂量组(D、E组)连续7d空服口服非布司他片40mg或80mg。各剂量组于给药前及给药后在设计的时间点从肘静脉取血。全血经离心取上层血浆样品用于非布司他的浓度测定。血浆样品用乙腈沉淀蛋白,上清液用Capcell PAK MG C18分析柱(50×4.6 mm I.D.,5μm),加C18保护柱(4×3.0 mm I.D.,5μm)进行分离。本实验流动相为乙腈-水-甲酸(67/33/0.1,v/v/v);流速为0.80ml/min;柱温40oC;进样量:5μl;单个样品运行时间为2.8min。采用串联四级杆质谱进行检测,离子源为电喷雾电离源(Turbo Spray源),扫描方式为负离子模式下选择反应监测(MRM),用于定量分析的离子反应分别为m/z 315.1→m/z 271.0(非布司他)和m/z 322.1→m/z 170.0(格列齐特),扫描时间均为150 ms。方法学考察了选择性、线性范围、定量下限、精密度与准确度、标准溶液及储备液的稳定性、血浆样品稳定性、基质效应等内容。受试者的经时血药浓度用DAS2.0软件,采用非房室模型法计算药代动力学参数,然后采用SPSS 13.0软件对主要药代动力学参数进行统计分析。首先对单剂量试验数据进行药代动力学特征分析,Tmax用Kruskal-Wallis H非参数秩和检验,T1/2经方差分析,考察不同剂量组间的统计学差异,Cmax、AUC0-36h和AUC0-∞与剂量进行线性回归分析;然后分别考察各剂量组药代动力学参数的性别差异,Tmax用Wilcoxon非参数秩和检验,cmax、auc0-t、auc0-∞、t1/2采用独立样本t检验分析。多剂量试验所得的稳态药代动力学参数(css-max、t1/2、aucss)与对应单剂量试验的药代动力学进行独立样本t检验分析,考察体内有无蓄积及酶诱导或抑制作用。结果:非布司他血浆浓度在5.00-10000ng·ml-1范围内与面积之间线性关系良好,定量下限为5.00ng·ml-1,典型回归方程为:y=0.00491c+0.0061(r2=0.9972,n=8);低、中、高3个浓度水平的qc样品的日内rsd分别为6.00%、2.90%和3.20%,日间rsd分别为14.2%、12.3%和12.8%,准确度分别为108.1%、103.5%和97.5%,提取回收率分别为(119.2±4.7)%、(117.3±3.0)%和(110.5±3.6)%,三浓度水平下内标的提取回收率为(108.7±2.6)%;非布司他低、高浓度的基质效应分别为(92.4±5.87)%和(107.1±3.31)%,两浓度水平下内标的基质效应分别为(93.2±3.04)%和(103.2±5.16)%;非布司他工作液室温放置6h稳定、配制后使用8天,非布司他和内标储备液-20oc放置109d天、内标工作液5oc放置105d天均稳定;非布司他血浆样品室温放置6h、经历3次冻-融循环后、-70oc放置104d,经处理后的血浆样品放置于自动进样器(autosampler,as)内放置24h均稳定。单剂量40mg、80mg和120mg组给药后,tmax分别为(1.5±1.2)、(1.0±0.6)和(1.5±0.8)h,t1/2分别为(7.1±1.9)、(5.5±1.3)和(6.2±1.3)h,cmax分别为(2580±941)、(5014±906)和(9925±5211)μg·l-1,auc0-t分别为(7744±2360)、(17378±2406)和(34375±13772)h·μg·l-1;tmax、t1/2不同剂量组间无统计学差异;药代动力学参数cmax、auc0-36h和auc0-∞与剂量在40mg-120mg剂量范围内呈线性关系;不同性别间cmax、auc0-36h和auc0-∞与剂量在40mg-120mg剂量范围内也呈线性关系;40mg与120mg单剂量组间auc、cmax男女性别间差别有统计学意义,其余参数差异无统计学意义。非布司他在连续服用第5天即可达稳态,40mg*7d组与80mg*7d组的主要药动学参数cmax分别为(3209±983)和(6067±1868)μg·l-1,aucss分别为(10601±2793)和(18830±3004)h·μg·l-1,平均稳态血药浓度分别为(442±116)和(785±125)μg·l-1。结论:1本研究所建立的人血浆中非布司他的LC-MS/MS方法测灵敏、准确、简便、稳定,适用于非布司他的血药浓度的测定和临床药代动力学研究。2非布司他在健康志愿者体内呈一级消除动力学,Cmax和AUC与剂量呈显著正相关,在40mg-120mg剂量范围内具有线性动力学特征。3受试者单剂量服用非布司他片,40mg组和120mg组的AUC、Cmax显示有统计学意义的性别差异,80mg组没有。4多剂量试验结果表明,受试者服药后第5天即可达稳态,80mg组稳态AUC、Cmax与单次给药结果基本一致,表明体内没有蓄积;40mg组稳态AUC、Cmax与单次给药结果相比偏高。此结果可能与不同剂量组受试者的个体差异有关。