本研究的目的在于获得可抵御强毒猪链球菌2型(streptococcus suis type2,SS2)感染的保护性抗原肽,并分析其免疫特性,以期为研制低毒、高效的SS2蛋白亚单位疫苗提供科学依据。选取具有保护性或者具有重要免疫作用的蛋白——溶菌酶释放蛋白(muramidase-released protein,MRP)和枯草杆菌素样蛋白酶(subtilisin-like serine protease,sspA)。参考NCBI蛋白质数据库中MRP、sspA氨基酸序列和结构信息,避开蛋白的毒力结构域、舍弃信号肽段、去除膜锚定结构域和处于膜内(胞浆)的肽段。运用蛋白分析软件ANTHEPROT5.0对蛋白的二级结构(螺旋、折叠、转角、无规卷曲)和B细胞表位进行综合预测与分析(亲水性、疏水性、抗原性、跨膜结构、溶剂可及性等),确定蛋白的B细胞优势表位簇。使用Oligo6.0和Primer5.0设计出两端带合适酶切位点的引物并通过PCR获得预测的抗原肽段基因,酶切连接插入原核表达载体pET32a,导入表达菌株BL21表达菌株,构建重组抗原的原核表达系统。IPTG诱导表达,以渗透性休克法和热休克法纯化重组蛋白；使用灭活SS2免疫血清Western blot检测重组蛋白的免疫原性及其与SS2免疫血清的反应性。纯化的重组蛋白免疫雌性SPF CD1小鼠检测其安全性,用强毒SS2SDLVDU株攻毒重组蛋白免疫小鼠,评估重组蛋白的免疫保护效力。预测结果显示MRP的950～1210aa肽段、sspA的91～323aa肽段为B细胞优势表位簇。构建了上述肽段基因与pET32a的原核重组表达系统,重组蛋白可溶性表达,微量蛋白测定仪测定表达量为10mg/mL; Western blot显示重组蛋白具有良好的免疫原性和反应性；免疫安全性试验表明,MRP和sspA重组蛋白均安全可靠；免疫效力试验表明,MRP的950-1210aa肽段重组蛋白对小鼠的免疫保护率为40%,为菌体免疫所提供保护率的50%；sspA的91～323aa肽段重组蛋白虽然对小鼠不产生保护力,但是可以延缓小鼠的死亡时间,与MRP的950-1210aa肽段重组蛋白共同免疫的保护率为60%,表现了协同保护作用。